[发明专利]微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法

摘要

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法。本发明提供的微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法，包括以下步骤：优良株系选育、组织培养无菌组培瓶苗建立、热处理培养预脱毒、微茎尖培养脱毒、脱毒茎尖组织培养无菌繁殖体系建立、脱毒茎尖组织培养苗病毒检测和脱毒苗组培工厂化育苗等。本发明提供的获得增城蜜菊脱毒苗的方法，采用组织培养微茎尖结合热处理脱毒，并配合改进的培养基，培育无病毒苗成活率高，繁殖速度快，并且能够大规模的组培工厂化繁殖育苗，经济效益高。

主权项

1.一种微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)优良株系选育种植增城蜜菊原种，经观察，筛选出9株性状优良的单株，组织培养后获得幼苗，用获得的幼苗进行栽培种植试验，再从中筛选出6株性状优良的单株，同样经组织培养后进行栽培种植试验，最终筛选出3株性状优良的单株；(2)组织培养无菌组培瓶苗建立取步骤(1)获得的3株性状优良的单株中的嫩枝作为外植体，并进行消毒处理，然后将外植体接种到培养基JHr进行不定芽诱导培养20‑25天后；切取经不定芽诱导的芽作材料进行增殖继代接种培养，接种到培养基JH4中，每瓶培养基接种8节；切取经继代增殖培养的不定芽作材料进行生根诱导接种，接种后，用保鲜膜封好瓶口，放到塑料大棚进行生根炼苗，20～25天即得无菌组培瓶苗；(3)热处理培养预脱毒将步骤(2)所得的无菌组培瓶苗放入光照培养箱进行热处理培养，在温度为40℃、光照强度为2000Lux的光照培养箱中每天光照10h，连续培养72h，得预脱毒的培育苗；(4)微茎尖培养脱毒在无菌条件下于超净工作台解剖镜下切取步骤(3)所得预脱毒的培育苗的茎尖1.9～2.1cm，接种到脱毒尖不定芽诱导培养基JH7，在光照强度为2500～3500Lux、光照时间为7.0～8.0h、温度为23～27℃的条件下，培养25～30天，得脱毒不定芽；(5)脱毒茎尖组织培养无菌繁殖体系建立将步骤(4)所得的脱毒不定芽进行增殖继代培养，接种到不定芽初代培养基JH4中，在光照强度为2500～3500Lux，光照时间为7.0～8.0h，培养温度为23～27℃的条件下，培养20～25天，得脱毒茎尖组织培养苗；(6)脱毒茎尖组织培养苗病毒检测将步骤(5)所得脱毒茎尖组织培养苗用分子生物学鉴定法进行RNA病毒检测，筛选出不带病毒的脱毒茎尖组织培养苗；(7)脱毒苗组培工厂化育苗将步骤(6)中筛选出的不带病毒的脱毒茎尖组织培养苗接种到培养基JHr中诱导生根，培养20‑25天后，得组培瓶脱毒苗；将所得组培瓶脱毒苗转移到塑料大棚进行生根炼苗，培养20‑25天，得增城蜜菊脱毒苗。