[发明专利]一种3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法在审
| 申请号： | 201811046536.1 | 申请日： | 2018-09-08 |
| 公开（公告）号： | CN108957012A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 陆桂丽;黄炯;沙依兰·卡伊扎;苗书魁;马文戈;王杰;汪萍;夏俊 | 申请（专利权）人： | 新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心) |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 西安研创天下知识产权代理事务所(普通合伙) 61239 | 代理人： | 杨凤娟 |
| 地址： | 830011 新疆维吾尔自治区乌鲁*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法，包括以下步骤：应用方阵法确定3E6单抗腹水包被ELISA板浓度，37℃ 2小时，弃液体PBST洗3次；5%的脱脂奶粉300ul 37℃ 1小时，PBST洗3次；加小反刍兽疫Nigera75/1细胞毒（1:8），37℃ 1小时，PBST洗3次；加兔抗V蛋白血清1:100，同时设VERO细胞上清做对照，37℃ 45min，PBST洗3次；加兔二抗稀释浓度1:10000，100ul/孔，25℃ 45min，PBST洗3次；加TMB显色液100ul/孔，25℃ 3‑5min；2M硫酸终止液100ul/孔，450nm测ELISA OD值。 | ||
| 搜索关键词： | 腹水 包被 单抗 试剂盒 硫酸终止液 脱脂奶粉 细胞毒 血清 二抗 兔抗 稀释 方阵 应用 | ||
【主权项】：
1.一种3E6单抗腹水包被ELISA板的试剂盒的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：⑴应用方阵法确定3E6单抗腹水包被ELISA板浓度为0.5ul:2ml，37℃包被2小时，弃去液体PBST洗涤3次，3min/次；⑵5％的脱脂奶粉300ul 37℃封闭1小时，弃去封闭液PBST洗涤3次，3min/次；⑶加小反刍兽疫Nigera75/1细胞毒，筛选检测的最终浓度是1:8，37度1小时，弃去液体PBST洗涤3次，3min/次；⑷加兔抗V蛋白血清1:100，同时设VERO细胞上清做对照，37℃作用45min，弃去血清PBST洗涤3次，3min/次；⑸加抗兔二抗稀释浓度1:10000，100ul/孔，25℃作用45min，弃去液体PBST洗涤3次，3min/次；⑹加TMB显色液100ul/孔，25℃作用3‑5min；⑺2M硫酸终止液100ul/孔，450nm测定ELISAOD值。
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