[发明专利]一种外周血滤泡调节性T细胞浓度检测方法

摘要

本发明涉及一种外周血滤泡调节性T细胞浓度检测方法，属于细胞检测筛查方法技术领域，解决现有技术中Tfr细胞检测误差大、步骤繁琐的技术问题，解决方案为本方法包括以下步骤：S1、样本要求；S2、试剂准备：溶血素；抗体混合溶液：别藻蓝蛋白‑Cy^TM7试剂标记的CD3抗体溶液、藻红蛋白‑Cy^TM7试剂标记的CD4抗体溶液、BV510试剂标记的CD185抗体溶液、别藻蓝蛋白试剂标记的CD25抗体溶液、藻红蛋白试剂标记的CD127抗体抗体溶液，将上述五种标记过的抗体溶液按每人份比例混合在试剂管中，使用前振荡混匀；S3、外周血Tfr细胞浓度的检测。本发明可提供抗体混合试剂，质量控制较好，简化实验步骤，减少试验误差，细胞检测精度高，是一种可实现临床多个样本同时检验的单平台技术。

主权项

1.一种外周血滤泡调节性T细胞浓度检测方法，其特征在于包括以下步骤：S1、样本要求：规格为2ml的EDTA抗凝管作为实验样本；S2、试剂准备：溶血素；抗体混合溶液：a、别藻蓝蛋白‑CyTM7试剂标记的CD3抗体溶液，b、藻红蛋白‑CyTM7试剂标记的CD4抗体溶液，c、BV510试剂标记的CD185抗体溶液，d、别藻蓝蛋白试剂标记的CD25抗体溶液，e、藻红蛋白试剂标记的CD127抗体抗体溶液，上述五种标记过的抗体溶液体积比为1:1:1:1:4，将上述五种标记过的抗体溶液按每人份比例混合在试剂管中，使用前振荡混匀；S3、外周血Tfr细胞浓度的检测1）、使用反向移液技术向试剂管中加入步骤S1中采集的外周血血样50μl；2）、向试剂管中加入步骤S2中配制的抗体溶液混合液40μl；3）、将试剂管的头盖盖合后混匀震荡，然后室温避光静置15分钟，使抗体与试剂管中的外周血血样充分发生特异性结合；4）、向步骤3）中的试剂管中加入450μl步骤S2中准备好的溶血素，震荡后避光静置20分钟；5）、将步骤4）制得的标本放置于流式细胞仪上以分析流式细胞图，用BD FACSCantoTM软件获取10000个细胞进行检测，得出外周血Tfr细胞的相对计数及绝对计数。