[发明专利]一种电子线照射对小鼠IGF相关蛋白表达影响的检测方法

摘要

本发明属于辐射防护技术领域，涉及一种电子线照射对小鼠IGF相关蛋白表达影响的检测方法。所述的检测方法包括小鼠IGF相关蛋白表达量分析和/或小鼠IGF相关蛋白表达分布分析和/或小鼠肝组织中细胞凋亡情况分析，小鼠IGF相关蛋白表达量分析包括如下步骤：(1)小鼠肝脏总蛋白提取和浓度测定；(2)小鼠肝脏总蛋白电泳和Western‑Blot检测；(3)分子量与表达量分析，小鼠IGF相关蛋白表达分布分析、小鼠肝组织中细胞凋亡情况分析包括如下步骤：(A)制片；(B)共聚焦显微镜观察。利用本发明的检测方法，能够探索辐射致损伤、癌症的机制，结果可为辐射对肝脏的早期损伤提供理论依据，为放疗提供新的靶向指标。

主权项

1.一种电子线照射对小鼠IGF相关蛋白表达影响的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括小鼠IGF相关蛋白表达量分析和/或小鼠IGF相关蛋白表达分布分析和/或小鼠肝组织中细胞凋亡情况分析，所述的小鼠IGF相关蛋白表达量分析包括如下步骤：(1)小鼠肝脏总蛋白提取和浓度测定：小鼠在电子线辐射照射后麻醉提取肝脏，肝脏经清洗后加入蛋白裂解液进行组织匀浆，匀浆液静置后离心取上清，测定上清中蛋白质浓度；(2)小鼠肝脏总蛋白电泳和Western‑Blot检测：对上清进行SDS‑PAGE电泳和Western‑Blot检测；(3)表达量分析：用凝胶图像处理系统分析Western‑Blot显色目标条带的分子量与表达量，所述的小鼠IGF相关蛋白表达分布分析包括如下步骤：(A)制片：小鼠在电子线辐射照射后麻醉提取肝脏，剔除多余脂肪并经清洗后放入含多聚甲醛的溶液中进行固定，固定后的肝脏涂包埋剂覆盖组织，在冰冻机中进行切片后烘箱干燥；(B)共聚焦显微镜观察：干燥后的切片经清洗、盐酸处理并中和后破膜，清洗、BSA封闭并先后加入一抗、洗涤、加入二抗、洗涤，然后在染色后在共聚焦显微镜下采集图像进行分析，所述的小鼠肝组织中细胞凋亡情况分析包括如下步骤：(I)制片：小鼠在电子线辐射照射后麻醉提取肝脏，剔除多余脂肪并经清洗后放入含多聚甲醛的溶液中进行固定，固定后的肝脏涂包埋剂覆盖组织，在冰冻机中进行切片后烘箱干燥；(II)共聚焦显微镜观察：干燥后的切片经低聚甲醛处理、清洗后进行固定、洗涤，然后在先后加缓冲液、抗体分别进行孵育后再孵育染色，清洗后在共聚焦显微镜下采集图像进行分析。