[发明专利]一种甜菜黄素的生物生产方法在审
| 申请号： | 201811064631.4 | 申请日： | 2018-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN109295123A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 赵广荣;侯亚男;于思礼 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12P17/12 | 分类号： | C12P17/12;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津一同创新知识产权代理事务所(普通合伙) 12231 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种甜菜黄素的生物生产方法，包括如下步骤：合成具有两个Ptrc启动子的高拷贝表达载体pHTrc，合成4,5‑多巴雌二醇双加氧酶基因syndoda，从大肠杆菌BL2l(DE3)中克隆得到內源酪氨酸羟化酶基因HpaBC；将基因syndoda和HpaBC与表达载体连接，得到重组表达载体pHTDH，并转化到高产L‑酪氨酸的菌株SyBE‑002444中得到重组大肠杆菌BTX1；将活化的BTX1接种到添加卡那霉素的LB培养基中培养，加入IPTG诱导，饲喂组氨酸、赖氨酸或精氨酸，继续发酵培养，得到甜菜黄素。本发明利用游离诱导表达进行发酵生产不同种类甜菜黄素，解决单一种类的甜菜黄素难以获得的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 甜菜黄素 表达载体 生物生产 酪氨酸羟化酶基因 合成 双加氧酶基因 重组表达载体 重组大肠杆菌 大肠杆菌 发酵培养 卡那霉素 诱导表达 雌二醇 高拷贝 精氨酸 赖氨酸 酪氨酸 启动子 组氨酸 多巴 活化 菌株 饲喂 发酵 游离 接种 克隆 高产 基因 转化 生产 | ||
【主权项】：
1.一种甜菜黄素的生物生产方法，其特征是包括如下步骤：(1)设计并全合成具有两个Ptrc启动子的高拷贝表达载体pHTrc，所述pHTrc的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；人工全合成4,5‑多巴雌二醇双加氧酶基因syndoda，所述基因syndoda的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；从大肠杆菌BL2l(DE3)中克隆得到內源酪氨酸羟化酶基因HpaBC，所述基因HpaBC的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；(2)将所述基因syndoda通过酶切连接方式与表达载体pHTrc的第一套启动子连接，得到重组表达载体pHTD；将所述基因HpaBC通过酶切连接方式与表达载体pHTD的第二套启动子连接，得到重组表达载体pHTDH；(3)将重组表达载体pHTDH转化到高产L‑酪氨酸的菌株SyBE‑002444中，对单克隆筛选，获得产甜菜黄素的重组大肠杆菌BTX1；(4)将产甜菜黄素的重组大肠杆菌BTX1在添加卡那霉素的LB培养基中活化10‑12小时；(5)将活化的重组大肠杆菌BTX1按1％‑2％体积比接种到添加卡那霉素的LB培养基中，培养至OD为4‑6，转接到M9培养基中，继续培养至对数期；加入IPTG，继续培养，饲喂组氨酸、赖氨酸或精氨酸，继续发酵培养，得到甜菜黄素，所述IPTG为异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷的缩写。
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