[发明专利]基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测方法及试剂盒在审
申请号: | 201811066830.9 | 申请日: | 2018-09-13 |
公开(公告)号: | CN109266762A | 公开(公告)日: | 2019-01-25 |
发明(设计)人: | 单斌;宋宇;徐秋月;钱源;段勇 | 申请(专利权)人: | 昆明医科大学第一附属医院 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/385 |
代理公司: | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人: | 汤东凤 |
地址: | 650032 云*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | 本发明涉及生物技术领域,具体涉及基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测方法及试剂盒。基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测方法,包括引物设计、模板制备和扩增反应等步骤,该检测方法能快速有效的检出血液中的铜绿假单胞菌;基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测试剂盒,包含红细胞裂解液、核酸提取试剂、LAMP检测试剂和LAMP引物组,该试剂盒包含所有LAMP实验所需所有试剂,便于对全血样品进行处理和检测。 | ||
搜索关键词: | 铜绿假单胞菌 试剂盒 检测 核酸提取试剂 红细胞裂解液 生物技术领域 检测试剂 扩增反应 模板制备 全血样品 引物设计 检出 血液 | ||
【主权项】:
1.基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测方法,其特征在于,包括以下步骤:引物设计:采用Primer Explorer V5设计LAMP引物,将铜绿假单胞菌特异性基因导入,生成4组引物,每套引物包含F3、B3、FIP、BIP和LB或LF,上述引物组分别命名为XD1、XD2、XD 3、XD4;模板制备:在待检测血液样本中加入红细胞裂解液,放置5min,使红细胞裂解;转速为3000rpm/min,时间为5min进行离心,使白细胞沉积;取上清液,转速为14000rpm/min,时间为10min进行离心,保留200μL上清与细菌沉渣混匀,用核酸提取试剂和核酸提取仪提取DNA后进行LAMP检测;扩增反应:反应体系的体积共25μL,包括WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix 12.5μL、四组LAMP引物组中的一组2.5μL、DNA模板5uL、去离子水补足到25μL;反应条件:65℃进行15‑40分钟;阳性结果反应液由红色变为黄色,阴性结果反应液一直都为红色,根据颜色对比判断样本中是否含有铜绿假单胞菌。
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