[发明专利]基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201811066830.9 | 申请日： | 2018-09-13 |
| 公开（公告）号： | CN109266762A | 公开（公告）日： | 2019-01-25 |
| 发明（设计）人： | 单斌;宋宇;徐秋月;钱源;段勇 | 申请（专利权）人： | 昆明医科大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/385 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 650032 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，具体涉及基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测方法及试剂盒。基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测方法，包括引物设计、模板制备和扩增反应等步骤，该检测方法能快速有效的检出血液中的铜绿假单胞菌；基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测试剂盒，包含红细胞裂解液、核酸提取试剂、LAMP检测试剂和LAMP引物组，该试剂盒包含所有LAMP实验所需所有试剂，便于对全血样品进行处理和检测。 | ||
| 搜索关键词： | 铜绿假单胞菌 试剂盒 检测 核酸提取试剂 红细胞裂解液 生物技术领域 检测试剂 扩增反应 模板制备 全血样品 引物设计 检出 血液 | ||
【主权项】：
1.基于LAMP原理的铜绿假单胞菌检测方法，其特征在于，包括以下步骤：引物设计：采用Primer Explorer V5设计LAMP引物，将铜绿假单胞菌特异性基因导入，生成4组引物，每套引物包含F3、B3、FIP、BIP和LB或LF，上述引物组分别命名为XD1、XD2、XD 3、XD4；模板制备：在待检测血液样本中加入红细胞裂解液，放置5min，使红细胞裂解；转速为3000rpm/min，时间为5min进行离心，使白细胞沉积；取上清液，转速为14000rpm/min，时间为10min进行离心，保留200μL上清与细菌沉渣混匀，用核酸提取试剂和核酸提取仪提取DNA后进行LAMP检测；扩增反应：反应体系的体积共25μL，包括WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix 12.5μL、四组LAMP引物组中的一组2.5μL、DNA模板5uL、去离子水补足到25μL；反应条件：65℃进行15‑40分钟；阳性结果反应液由红色变为黄色，阴性结果反应液一直都为红色，根据颜色对比判断样本中是否含有铜绿假单胞菌。
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