[发明专利]基于单细胞水平的早期癌症检测方法

摘要

本发明公开了一种基于单细胞水平的早期癌症检测方法，该方法将乳酸脱氢酶修饰在纳米探头尖端，选择人乳腺癌细胞株MCF7作为试验用细胞株，可以催化乳酸转化并产生NADH作为荧光检测物来监测肿瘤细胞的细胞外乳酸浓度。本发明检测方法细胞外乳酸浓度的检测结果精确，能够真实反映在某个浓度下对应的单个细胞荧光信号值，从而能够真实准确反映乳酸的胞外释放。本发明检测方法能够从单细胞水平区分正常细胞与癌细胞的代谢，这对于理解癌变的分子机理和早期癌症的诊断以及预后具有重要的意义。

主权项

1.一种基于单细胞水平的早期癌症检测方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1，纳米探头尖端二氧化硅表面在APTES乙醇溶液中进行硅烷化，干燥后在戊二醛溶液中进行活化，然后在乳酸脱氢酶溶液中培养进行固定化；步骤2，选择人乳腺癌细胞株MCF7作为试验用细胞株，并对试验用细胞株进行消化吹打处理形成细胞悬液；步骤3，用血球计数板测定细胞悬液中的细胞密度，以细胞密度为1×104个细胞/cm2接种到细胞浴槽的盖玻片上用于细胞附着；步骤4，细胞附着24h、25h、 26h、27h后，用PBS缓冲液冲洗粘附在盖玻片上的细胞3次，向细胞浴槽中加入100μl、110ul、120ul、130ul的细胞培养液，细胞培养液中添加NAD+溶液；步骤5，将细胞浴槽放入纳米光电生化检测仪，在倒置荧光生物显微镜下调整纳米探头靠近细胞膜，检测并记录反应过程中释放的NADH荧光光子数。