[发明专利]一种贻贝粘蛋白的制备方法

摘要

本发明涉及一种蛋白质的制备方法，尤其涉及一种贻贝粘蛋白的制备方法。本方法通过采用采用冷冻压缩释放破碎法以及高压高频、低压高频反复处理并且选择合适的电场参数，最终使提取得到的贻贝粘蛋白收得率在0.0572‑0.0683mg/(g贻贝)。本发明通过特定的电压频率控制，使贻贝足组织的细胞膜尽可能破碎，蛋白质得到最大程度的释放，经过纯化后最终得到的贻贝粘蛋白的提取率大大提升，并且全部提取过程未采用任何有毒有害试剂，提取的粘蛋白能直接用于伤口处理。

主权项

1.一种贻贝粘蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)切取贻贝足，使用生理盐水清洗贻贝组织，用剪成适宜大小小块，加入预冷的有机酸溶液，在冰水浴中施加高频脉冲处理30‑45min，过滤得到第一滤渣和第一滤液；2)用去离子水清洗第一滤渣后向其中加入有机酸调节pH至4.5‑6.5，采用冷冻压缩释放破碎法在‑40℃～‑25℃和80‑100MPa的条件下进行破碎处理，过滤得到第二滤渣和第二滤液；3)向第二滤渣中添加弱碱溶液将pH值调节至8‑9，然后按照一次高压高频‑‑一次低压高频‑‑二次低压高频‑‑二次高压高频的脉冲电场对溶液进行处理并重复3‑5次，过滤得到第三滤渣和第三滤液，所述一次高压高频的参数为15‑20kV、100‑120kHz、一次低压高频的参数为700‑800V、100‑120kHz、二次高压高频的参数为8‑10kV、100‑120kHz、二次低压高频的参数为500‑700V、100‑120kHz，各次处理时间保持在15‑30min；4)将第一滤液、第二滤液、第三滤液混合并调节pH至7‑8，然后离心分析，取上清液过滤纯化得到贻贝粘蛋白。