[发明专利]同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法

摘要

本发明公开了同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法，包括如下步骤：(1)恩替卡韦对照品溶液和恩替卡韦同位素内标溶液配制；(2)建立恩替卡韦标准曲线；(3)采集待测样品溶液的色谱图；(4)待测样品中恩替卡韦浓度的确定。采用同位素内标，可以有效减少基质效应，使检测结果更加准确，分析时间缩短至4.5min，适合高通量的样本检测，能满足临床样本检测的要求；采用直接蛋白沉淀法，采用有机溶剂直接蛋白沉淀，样本前处理简单快速，成本低，耗时短，适合大批量样本的处理和检测。

主权项

1.同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：配制恩替卡韦对照品溶液和恩替卡韦同位素内标溶液的步骤；用甲醇分别溶解恩替卡韦和恩替卡韦同位素内标，制成已知浓度的恩替卡韦对照品储备液和已知浓度的恩替卡韦同位素内标溶液；用甲醇水将恩替卡韦对照品储备液稀释成一系列具有不同已知浓度的恩替卡韦对照品溶液；S2：建立恩替卡韦标准曲线的步骤：分别吸取一定体积的具有不同已知浓度的恩替卡韦对照品溶液，分别加入1～10倍体积的空白血清或血浆，然后分别加入3～5倍体积的恩替卡韦同位素内标溶液，涡旋混匀，离心，然后取一定体积的上清液，再离心，最后取一定体积的上清液，得到一系列具有不同已知浓度的恩替卡韦标准曲线工作液；在相同的超高效液相色谱质谱条件下，将一定体积的具有不同已知浓度的恩替卡韦标准曲线工作液分别注入超高效液相色谱质谱联用仪中，获得一系列具有不同已知浓度的恩替卡韦标准曲线工作液的色谱图；以恩替卡韦标准曲线工作液的色谱图中恩替卡韦色谱峰峰面积与恩替卡韦同位素内标色谱峰峰面积的比值为纵坐标或横坐标，以相应的恩替卡韦标准曲线工作液的恩替卡韦浓度为横坐标或纵坐标，建立恩替卡韦标准曲线；S3：采集待测样品溶液的色谱图的步骤；吸取一定体积的血清或血浆作为待测样品，加入3～5倍体积的恩替卡韦同位素内标溶液，涡旋混匀，离心，然后取一定体积的上清液，再离心，最后取一定体积的上清液作为待测样品溶液；在与S2步骤中相同的超高效液相色谱质谱条件下，取一定体积的待测样品溶液注入超高效液相色谱质谱联用仪中，获得待测样品溶液的色谱图；S4：计算待测样品中恩替卡韦浓度的步骤；将待测样品溶液色谱图中恩替卡韦色谱峰峰面积与恩替卡韦同位素内标色谱峰峰面积的比值带入已建立的恩替卡韦标准曲线，计算出待测样品中恩替卡韦的浓度。