[发明专利]用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法在审
| 申请号： | 201811100657.X | 申请日： | 2018-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN109022334A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 李海利;徐引弟;王治方;张青娴;朱文豪;方剑玉;郎利敏;游一;张立宪;王克领 | 申请（专利权）人： | 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N1/02;C12R1/63 |
| 代理公司： | 郑州明华专利代理事务所(普通合伙) 41162 | 代理人： | 高丽华 |
| 地址： | 450000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于空肠弯曲菌、结肠弯曲菌和胎儿弯曲菌等弯曲菌的快速分离纯化培养方法。该方法包括以下步骤：无菌采集动物粪便病料，装入PBS液中备用。取含有目的样品的PBS液加到过滤器1中，将过滤器1放入到收集器1中，11000 rpm‑13000 rpm离心0.5‑2 min；将过滤器1中的滤液取出放入到过滤器2中，将过滤器2放入到收集器2中，11000 rpm‑13000 rpm离心0.5‑2 min；取过滤器2中的液体均匀涂于平板培养基中培养48‑72 h；挑取单菌落接种至纯化培养基中进行纯化。本发明方法适合于从动物粪便等复杂基质中对弯曲菌进行分离纯化，提高样品中弯曲菌的分离率和检出率。可避免因用添加抗生素类药物的选择性培养基而造成弯曲菌难分离及分离率低等难题。 | ||
| 搜索关键词： | 过滤器 弯曲菌 放入 纯化培养 快速分离 收集器 抗生素类药物 生物技术领域 选择性培养基 结肠弯曲菌 空肠弯曲菌 平板培养基 胎儿弯曲菌 采集动物 动物粪便 方法适合 分离纯化 复杂基质 培养基 单菌落 检出率 病料 无菌 粪便 装入 备用 接种 取出 | ||
【主权项】：
1.一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：包括以下步骤：（1）目的样品的采集：无菌采集动物粪便病料0.1 g‑0.5 g，装入0.5‑1 ml的PBS液中备用；（2）分离纯化培养：①取含有目的样品的PBS液0.5‑0.8ml加到过滤器1中，所述过滤器1的滤膜厚度为25‑35µm，将过滤器1放入到收集器1中，以11000 rpm‑13000 rpm的转速离心0.5‑2 min；②将过滤器1中的滤液取出放入到过滤器2中，所述过滤器2的滤膜厚度为5µm，将过滤器2放入到收集器2中，以11000 rpm‑13000 rpm的转速离心0.5‑2 min；③取过滤器2中的液体5‑20 µl均匀涂于平板培养基中培养24‑48 h,培养温度为40‑45℃；④从平板培养基中挑取单菌落接种至纯化培养基中进行纯化，纯化时间为24‑48h，纯化温度为40‑45℃；⑤从纯化培养基中提取细菌基因组DNA，进行分子诊断，扩增出目的基因片段，即可判定为弯曲菌。
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