[发明专利]一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制

摘要

本发明公开了一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制，包括如下步骤：（1）改性复合粉的制备；（2）原料称取；（3）培养基的配制；（4）培养基灭菌。本发明最终配制的培养基营养搭配合理，添加的改性复合粉，有助于改善培养基的营养配制，释放负离子，促进菌体的生长，增加活菌数，提高单位体积质粒总含量，单位菌体质粒含量，单位质量质粒中超螺旋质粒的含量，并且对于质粒的纯度有很好的改善作用，极具市场推广价值。

主权项

1.一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制，其特征在于，包括如下步骤：（1）改性复合粉的制备：a. 将黄土石和碳酸镧按照重量比为2~3:1共同投入碱液中进行浸泡，浸泡时碱液内的温度控制为60~70℃，浸泡处理20~30min后滤出；b. 将操作a中滤出的黄土石和碳酸镧混合物投入酸液中进行浸泡，浸泡时酸液内的温度控制为50~56℃，浸泡处理16~18min后滤出；c. 将操作b中滤出的黄土石和碳酸镧混合物投入煅烧炉中进行煅烧处理，煅烧炉内的温度控制为920~980℃，煅烧处理5~7min后，将煅烧炉中的温度降至102~104℃，然后取出混合物立马投入改性液中进行浸泡，浸泡过程在微波炉中进行，浸泡处理12~18min后，过滤得滤渣；d. 将操作c所得的滤渣置于烘箱内进行干燥，烘箱内的温度控制为65~75℃，干燥至含水率为6~8%即得改性复合粉；（2）原料称取：称取相应重量份的甘油20~24份、胰蛋白胨12~16份、酵母提取物13~15份、氯化钠12~14份、微量元素0.6~0.7份、步骤（1）所得改性复合粉8~10份、无菌水450~550份备用；（3）培养基的配制：将步骤（2）称取的无菌水注入搅拌罐内，将搅拌罐内的温度升至98~102℃，然后将步骤（2）中称取的甘油、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、微量元素、步骤（1）所得改性复合粉依次投入搅拌罐内，边搅拌边投入，持续搅拌50~60min，搅拌的同时进行超声波处理；（4）培养基灭菌：将步骤（3）中搅拌混匀的混合液置于高温高压锅内进行灭菌处理，灭菌的温度为119~123℃，灭菌的时间为18~24min，灭菌结束后，取出混合液即得培养基。