[发明专利]一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制在审
申请号: | 201811105667.2 | 申请日: | 2018-09-21 |
公开(公告)号: | CN109295084A | 公开(公告)日: | 2019-02-01 |
发明(设计)人: | 赵建阳;王世凯;韦小艳 | 申请(专利权)人: | 安徽欣伯玉生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N1/21;C12N1/38;C12R1/19 |
代理公司: | 合肥广源知识产权代理事务所(普通合伙) 34129 | 代理人: | 宋宇晴 |
地址: | 236600 安徽省阜阳市太和*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | 本发明公开了一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制,包括如下步骤:(1)改性复合粉的制备;(2)原料称取;(3)培养基的配制;(4)培养基灭菌。本发明最终配制的培养基营养搭配合理,添加的改性复合粉,有助于改善培养基的营养配制,释放负离子,促进菌体的生长,增加活菌数,提高单位体积质粒总含量,单位菌体质粒含量,单位质量质粒中超螺旋质粒的含量,并且对于质粒的纯度有很好的改善作用,极具市场推广价值。 | ||
搜索关键词: | 培养基 配制 质粒 大肠杆菌工程菌 高效表达质粒 改性复合 超螺旋质粒 释放负离子 市场推广 营养搭配 营养配制 活菌数 灭菌 称取 菌体 制备 体质 生长 | ||
【主权项】:
1.一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制,其特征在于,包括如下步骤:(1)改性复合粉的制备:a. 将黄土石和碳酸镧按照重量比为2~3:1共同投入碱液中进行浸泡,浸泡时碱液内的温度控制为60~70℃,浸泡处理20~30min后滤出;b. 将操作a中滤出的黄土石和碳酸镧混合物投入酸液中进行浸泡,浸泡时酸液内的温度控制为50~56℃,浸泡处理16~18min后滤出;c. 将操作b中滤出的黄土石和碳酸镧混合物投入煅烧炉中进行煅烧处理,煅烧炉内的温度控制为920~980℃,煅烧处理5~7min后,将煅烧炉中的温度降至102~104℃,然后取出混合物立马投入改性液中进行浸泡,浸泡过程在微波炉中进行,浸泡处理12~18min后,过滤得滤渣;d. 将操作c所得的滤渣置于烘箱内进行干燥,烘箱内的温度控制为65~75℃,干燥至含水率为6~8%即得改性复合粉;(2)原料称取:称取相应重量份的甘油20~24份、胰蛋白胨12~16份、酵母提取物13~15份、氯化钠12~14份、微量元素0.6~0.7份、步骤(1)所得改性复合粉8~10份、无菌水450~550份备用;(3)培养基的配制:将步骤(2)称取的无菌水注入搅拌罐内,将搅拌罐内的温度升至98~102℃,然后将步骤(2)中称取的甘油、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、微量元素、步骤(1)所得改性复合粉依次投入搅拌罐内,边搅拌边投入,持续搅拌50~60min,搅拌的同时进行超声波处理;(4)培养基灭菌:将步骤(3)中搅拌混匀的混合液置于高温高压锅内进行灭菌处理,灭菌的温度为119~123℃,灭菌的时间为18~24min,灭菌结束后,取出混合液即得培养基。
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