[发明专利]基于类器官方法构建正常免疫小鼠人胃癌移植瘤模型的方法和应用

摘要

基于类器官方法构建正常免疫小鼠人胃癌移植瘤模型的方法和应用，本发明涉及一种医学肿瘤动物模型—基于类器官方法。本发明首次以“类器官”技术即‑利用微载体为基底材料，复合人胃癌细胞SGC‑7901/MKN‑45移植于C57BL/6小鼠皮下成功构建了具有正常免疫功能的人胃癌小鼠移植肿瘤模型。采用该法构建的肿瘤模型成瘤性好，成瘤率高达75％，移植瘤HE染色和免疫组化均符合人胃癌特点。与已有的免疫缺陷小鼠移植肿瘤模型相比，该模型可以更好的研究和进一步阐明肿瘤在免疫功能正常机体中发生、发展机制，同时也为抗癌药的研发提供了较以往更有价值的新的动物模型。本发明应用于肿瘤模型领域。

主权项

1.基于类器官方法构建正常免疫小鼠人胃癌移植瘤模型的方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：1)人胃癌肿瘤细胞的获取：取人胃癌肿瘤细胞SGC‑7901/MKN‑45复苏后，加入含有10％的胎牛血清的DMEM完全培养液，在温度为37℃、5％CO2培养箱中培养，24～48小时后换液，继续培养，传代3‑4次；2)以类器官方法建立三维肿瘤细胞培养模型：将微载体在体积百分含量为75％的酒精中浸泡48h后，用1×PBS缓冲液清洗5遍，于DMEM培养基中孵育24～48h；取步骤1)传代后指数生长期的人胃癌肿瘤细胞SGC‑7901/MKN‑45，若台盼蓝计数活细胞数>95％，则调整人胃癌肿瘤细胞SGC‑7901/MKN‑45浓度至2×107/mL；将调整后的人胃癌肿瘤细胞SGC‑7901/MKN‑45悬液与孵育好的微载体混合，得细胞‑微载体复合体；将其在温度为37℃、5％CO2培养箱中培养24～48h；3)小鼠胃癌移植瘤的构建：用1×PBS缓冲液清洗步骤2)孵育好的细胞‑微载体复合体清洗4遍，再用1×PBS缓冲液重悬细胞并调整细胞浓度至2×107/mL，调整微载体浓度至200ug～350ug/mL，得细胞‑微载体混悬液，并置于冰上备用；将细胞‑微载体混悬液注射于6‑8周的C57BL/6小鼠皮下，体内植入20‑30天后，即构建完成正常免疫小鼠人胃癌移植瘤模型。