[发明专利]一种长喙壳菌原生质体的制备方法在审
| 申请号： | 201811121807.5 | 申请日： | 2018-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN109161485A | 公开（公告）日： | 2019-01-08 |
| 发明（设计）人： | 李健强;张治萍;李倩;韩惠兰;李迎宾;罗来鑫;蒋娜 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 陈波 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了属于生物工程技术领域的一种长喙壳菌原生质体的制备方法。所述制备方法，包括步骤如下：1)菌株活化培养：将保存的长喙壳菌接种至MYEA平板培养基中进行活化培养；2)菌丝体制备及收集：在菌落边缘取菌丝块，接入液体培养基中进行摇床培养，用滤膜过滤收集菌丝；3)酶解及原生质体收集：将收集的菌丝体用酶解液酶解，酶解后用渗透压稳定剂洗涤，离心去除酶解液，再用STC溶液洗涤，离心收集，得到原生质体。本发明的制备方法，工艺简单，对设备要求低，易于操作，利用本发明方法进行生产原生质体产量可达5.0‑7.0×107个/ml。 | ||
| 搜索关键词： | 原生质体 制备 长喙壳菌 酶解 酶解液 生物工程技术领域 渗透压稳定剂 菌丝体制备 平板培养基 液体培养基 菌丝 活化培养 菌落边缘 菌株活化 离心去除 离心收集 滤膜过滤 溶液洗涤 摇床培养 对设备 菌丝块 菌丝体 洗涤 接种 保存 生产 | ||
【主权项】：
1.一种长喙壳菌原生质体的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：1)菌株活化培养：将保存的长喙壳菌接种至MYEA平板培养基中进行活化培养；2)菌丝体制备及收集：在菌落边缘取菌丝块，接入液体培养基中进行摇床培养，用滤膜过滤收集菌丝；3)酶解及原生质体收集：将收集的菌丝体用酶解液酶解，酶解后用渗透压稳定剂洗涤，离心去除酶解液，再用STC溶液洗涤，离心收集，得到原生质体；其中所述酶解液为含有25‑30mg/ml崩溃酶和20‑25mg/ml裂解酶的0.5M MgSO4溶液。
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