[发明专利]一种转移因子胶囊中多肽的定量检测方法

摘要

本发明一种转移因子胶囊中多肽的定量检测方法，由“HPLC‑氨基酸差值”法测定，用建立的衍生化‑HPLC法分别测定转移因子胶囊中总氨基酸含量以及游离氨基酸含量，以两者差值代表样品中多肽含量。采用异硫氰酸苯酯(PITC)衍生化法对氨基酸进行柱前衍生；检测色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱；以甲醇‑乙腈‑水(20:60:20)为流动相A，以0.1mol/L醋酸钠缓冲溶液(用冰醋酸调节pH值为6.3)为流动相B进行梯度洗脱。采用上述色谱条件分别测定转移因子胶囊中总氨基酸含量及游离氨基酸含量，以两者差值代表样品中多肽含量；经系统的验证研究该检测方法无其他物质干扰、专属性强、准确可靠，能有效地对转移因子胶囊中的多肽含量检测与监控。

主权项

1.一种转移因子胶囊中多肽的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备转移因子胶囊中总氨基酸含量测定供试品溶液精密称取转移因子胶囊内容物1.0g，加入6～10mL浓度为6mol/L的盐酸溶液进行微波水解，然后用6～10mL浓度为6mol/L的氢氧化钠溶液中和，再用0.1mol/L盐酸溶液定容至50mL，制得总氨基酸测定衍生用供试品溶液；将该总氨基酸测定衍生用供试品溶液采用异硫氰酸苯酯乙腈溶液进行衍生处理，制得转移因子胶囊中总氨基酸含量测定供试品溶液；2)制备转移因子胶囊中游离氨基酸供试品溶液精密称取转移因子胶囊内容物约1.0g，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液适量，振荡2min使转移因子溶解后，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为游离氨基酸测定衍生用供试品溶液；将该游离氨基酸测定衍生用供试品溶液采用异硫氰酸苯酯乙腈溶液进行衍生处理，制得转移因子胶囊中游离氨基酸供试品溶液；3)构建标准曲线方程精密称取各对照品氨基酸制成贮备液，然后将贮备液制成构建标准曲线所需的对照品系列溶液，再对得到对照品系列溶液进行衍生处理，然后利用高效液相色谱法对衍生后的对照品系列溶液进行检测获得色谱图，以各氨基酸对照品浓度对各氨基酸峰面积按最小二乘法进行线性回归，求出标准曲线方程及线性相关系数；4)测定样品构建色谱图分别精密量取步骤1)制得的转移因子胶囊中总氨基酸含量测定供试品溶液和步骤2)制得的转移因子胶囊中游离氨基酸供试品溶液，利用高效液相色谱法在与步骤3)相同的色谱检测条件下获得色谱图，提取转移因子胶囊中各氨基酸对应的色谱峰面积；5)计算转移因子胶囊中多肽含量根据步骤3)获得的标准曲线方程和步骤4)获得的色谱峰的面积，从各氨基酸回归方程中求出游离氨基酸及总氨基酸的含量；用总氨基酸项下测得的各氨基酸含量分别减去游离氨基酸项下测得的各氨基酸含量，并将各计算结果相加，得到转移因子胶囊中的多肽含量。