[发明专利]一种基于双衍生化技术的游离脂肪酸质谱定性定量分析方法

摘要

本发明涉及一种基于双衍生化技术的游离脂肪酸质谱定性定量分析方法,包括如下步骤：1）不饱和脂肪酸双键的光化学衍生化反应；2）脂肪酸羧基端的N，N‑二乙基乙二胺衍生化反应；3）脂肪酸精准结构的定性方法；4）脂肪酸的定量方法。本发明利用所建立的方法对实际样品中游离脂肪酸进行精准定性和定量分析，解决了不饱和脂肪酸尤其是多不饱和脂肪酸的双键位置难以鉴定，以及脂肪酸在负离子模式下电离效率低和检测灵敏度不足的困难，实现了对实际样品中游离脂肪酸高灵敏度、准确的定性定量分析。

主权项

1.一种基于双衍生化技术的游离脂肪酸质谱定性定量分析方法，其特征在于它包括如下步骤：1）不饱和脂肪酸的光化学衍生化反应：将待测样品中加入内标，然后提取游离脂肪酸，得到游离脂肪酸提取液；所得游离脂肪酸提取液以丙酮作为Paternò−Büchi反应试剂，在紫外光下进行光化学衍生化反应，得到初次衍生后的待测样品溶液；2）脂肪酸的N，N‑二乙基乙二胺衍生化反应：将步骤1）所得初次衍生后的待测样品溶液以N，N‑二乙基乙二胺作为衍生试剂进行衍生化反应，得到二次衍生后的待测样品溶液；3）采集数据：将步骤2）所得二次衍生后的待测样品溶液进行质谱分析，选择正离子模式电喷雾电离源，选择73Da中性丢失扫描‑增强离子扫描作为质谱扫描模式，采集游离脂肪酸衍生物的谱图和谱峰数据；4）定性分析：根据步骤3）所得谱图和谱峰数据，确定对应各脂肪酸衍生物的准分子离子峰；同时对于存在双键位置异构体的不饱和脂肪酸，其所含双键的位置不同，其分别对应的衍生产物在质谱碰撞诱导解离中分别产生不同特征性m/z的碎片离子，称之为诊断离子，其能确定存在双键位置异构体的不饱和脂肪酸中所含双键的位置，从而对待测样品中的游离脂肪酸实现定性分析；5）绘制标准曲线：a、选择脂肪酸标准品并用溶剂稀释成一系列浓度的标准溶液，分别加入内标后，在与步骤1）、步骤2）相同的条件下进行两次衍生化反应，得到标准样品的进样溶液；将标准样品的进样溶液按照与步骤3）相同的条件进行质谱分析，采集游离脂肪酸衍生物的谱图和谱峰数据；b、对存在双键位置异构体的不饱和脂肪酸，以标准溶液中不饱和脂肪酸双键位置异构体的浓度比值为横坐标，所对应二次衍生产物诊断离子的强度比值为纵坐标，建立诊断离子强度比值与不饱和脂肪酸浓度比值之间的标准曲线；6）定量分析：根据步骤3）所得谱图中游离脂肪酸衍生物与内标衍生物的准分子离子峰强度比值，结合内标的浓度，对待测样品中的游离脂肪酸进行定量分析；待测样品中存在双键位置异构体的不饱和脂肪酸，根据内标定量得到异构体的总量，然后，根据所对应二次衍生产物诊断离子强度比值，结合诊断离子强度比值与不饱和脂肪酸浓度比值之间的标准曲线，对待测样品中存在各个双键位置异构体进行定量分析。