[发明专利]一种圆柏离体快繁方法

摘要

本发明提供一种圆柏的离体快繁方法，涉及植物培育繁殖技术领域。圆柏为柏科圆柏属常绿乔木，是我国的特产树种。圆柏具有材质优良、耐寒、耐热、耐旱、耐湿等多种优良特性，因而常被作为荒山造林、庭园观赏、城市绿化和用材树种。同时，又是水土保持及固沙防风树种，能抵抗多种有害气体。圆柏还有药用价值，有祛风散寒、活血消肿、解毒利尿的功效。本发明以圆柏一年生茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养及炼苗等过程实现了圆柏的离体再生，为加强其苗木选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持。

主权项

1.一种圆柏离体快繁方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取圆柏树冠中上部1年生茎段，用洗衣粉刷洗干净表面灰尘杂物，再用清水冲洗干净，将洗净后外植体剪成3～5cm小段，置于烧杯中，流水冲洗8h；在超净工作台中，先用无菌水将茎段冲洗3次，用75％酒精消毒1min后再用无菌水清洗5次，再用0.1％升汞消毒9min，然后用无菌水冲洗5次。(2)将经步骤(1)处理过的茎段置于无菌滤纸上，晾干后切去少许外植体切口后，切成约1.5～2.0cm长茎段，接种于下列培养基中：1/2MS培养基+(0.1～1.0mg/L)6‑BA+(0.1～1.0mg/L)NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH控制在5.8～6.0、温度为25±2℃、光照强度为1500～2200Lx、光照时间为12h/d的条件下进行诱导培养；接种20d后，腋芽和顶芽处即萌出约2mm长的绿色小芽，部分茎段基部膨大，培养30d时，转到相同培养基中继续培养。(3)当步骤(2)中茎段节间明显伸长，切割茎段接种到下列培养基中：1/2MS培养基+(0.1～0.5mg/L)6‑BA+(0.1～0.5mg/L)NAA+(0.1～0.3mg/L)IBA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂；pH控制在5.8～6.0、温度为25±2℃、光照强度为1500～2200Lx、光照时间为12h/d的条件下进行芽增殖培养。(4)当步骤(3)中芽明显伸长后置于下列培养基中：1/2MS+(0.1～1.0mg/L)NAA+(0.1～1.0mg/L)IBA+15g/L蔗糖+6g/L琼脂，WPM+(0.1～1.0mg/L)NAA+(0.1～1.0mg/L)IBA+15g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH控制在5.8～6.0、温度为25±2℃、光照强度为1500～2200Lx、光照时间为12h/d的条件下进行生根培养45d，得到生根苗。(5)将步骤(4)中生根苗先揭开三角瓶瓶口在培养室内放置3d，然后用镊子取出植株，洗掉根部附着的培养基，栽于灭菌的蛭石+砂土(1∶2)的基质中，适当遮阴，精心管理，浇以少量1/4MS营养液，30d后得到可移栽圆柏苗。