[发明专利]一种测定猪肉中的沙美特罗、茚达特罗、奥达特罗的方法

摘要

本发明提供一种测定猪肉中的沙美特罗、茚达特罗、奥达特罗的方法，包括方法步骤有：步骤一，样品制备；步骤二，提取待检测样品；步骤三，S3液相色谱‑串联质谱联用仪检测条件确定及检测；步骤四，标准工作曲线的绘制；步骤五，根据S2中待测溶液的液相色谱图计算出猪肉中的奥达特罗、茚达特罗、沙美特罗的含量。本发明方法首次同时测定猪肉中沙美特罗、茚达特罗、奥达特罗，解决了目前对猪肉中这沙美特罗、茚达特罗、奥达特罗的检测空白，离子响应值高，灵敏度高，检出限低，真正做到定性、定量准确、快速、高效、灵敏，可作为猪肉中三种药物的可靠检测手段。

主权项

1.一种测定猪肉中的沙美特罗、茚达特罗、奥达特罗的方法，其特征在于， 包括如下步骤：S1 样品制备：将被测猪肉取可食的肌肉样品切成小块（去除皮、骨、内脏、脂肪），置于绞肉机绞碎，制备好的样品置于‑16℃~‑20℃条件下保存；S2提取：（1）将绞碎的猪肉样品置于离心管中，加入乙酸钠缓冲液充分混匀，再加β‑葡萄糖醛甙酶，混匀后，30~50℃水浴水解；（2）待测样品加盖振荡，离心，取上清液于离心管中，加入高氯酸溶液，加盖振荡，将全部上清液转移至离心管中，用氢氧化钠溶液调节pH值至8~13；（3）水相加入乙酸乙酯，加盖涡旋混匀，振荡5~15min，离心3~10min，取有机相于离心管中，氮吹；水相加入乙酸乙酯，加盖涡旋混匀，振荡5~15min，离心3~10min，取有机相于同一离心管中，氮吹；水相加入叔丁基甲醚，加盖涡旋混匀，振荡5~15min，离心3~10min，取有机相于同一离心管中，氮吹，吹干；（4）加入乙酸钠缓冲液，加盖涡旋；（5）将阳离子交换小柱连接到真空过滤装置，依次用甲醇和水活化；将S2(4)得到的残渣溶液上柱，依次用水、2%甲醇水溶液、甲醇洗涤柱子并彻底抽干，最后用氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分，流速控制在0.5~1mL/min；洗脱液在35~45℃水浴下氮气吹干；（6）加入流动相复溶，将溶液转移至离心管中，1000r/min离心5~20min，用移液枪枪头取上清液至微量进样瓶中；S3液相色谱‑串联质谱联用仪检测条件确定及检测：色谱条件为：ACQUITY UPLC BEH C18（2.1mm×100mm），梯度洗脱；流动相A为含0.1%甲酸的5mmoL/L的乙酸铵水溶液，流动相B为0.1%甲酸‑乙腈溶液；色谱柱温度40℃，进样体积5μL，流速为0.3mL/min；质谱条件为：ESI正离子扫描模式，毛细管电压分别为3kV，源温400℃，去溶剂气温度：400℃，去溶剂气氩气流速：800L/h，椎孔气氮气流速：50 L/h，多反应检测模式检测；S4绘制标准工作曲线：量取奥达特罗、茚达特罗、沙美特罗混合标准储备溶液，配置成不同的混合标准工作液，外标法定量，按照其浓度和峰面积，绘制标准曲线，得到奥达特罗、茚达特罗、沙美特罗标准曲线；S5 计算：根据S2中待测溶液的液相色谱图中奥达特罗、茚达特罗、沙美特罗的峰面积及其对应的标准品的标准曲线，计算出猪肉中的奥达特罗、茚达特罗、沙美特罗的含量。