[发明专利]一种高通量检测油脂中磷脂含量的方法

摘要

本发明涉及一种高通量检测油脂中磷脂含量的方法法，该方法采用超高效液相色谱分离与电喷雾离子源高分辨串联飞行时间质谱正、负离子扫描模式对样品中磷脂成分进行定性和定量，其属于生物分析化学领域。该方法采用将待测样本进行预处理后，利用反应溶剂和萃取剂进行萃取，进行液相色谱‑质谱检测。该方法操作简单、选择性高，能快速、精确测定油脂中的磷脂。

主权项

1.一种高通量检测油脂中磷脂含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备油脂样品待测液取10μL油脂样品，加入到390μL水中，然后加入9μL混合内标溶液和951μL提取液，然后涡旋震荡，超声提取后离心，取上清液，将上清液旋干，然后加入100μL复溶液复溶，得到油脂样品待测液；所述混合内标溶液由10ppm的d15:0/18:1磷脂酰乙醇胺内标液、10ppmd18:1溶血性磷脂酰胆碱内标液和100ppm的d15:0/18:1/15:0甘油三酯的甲基叔丁基醚/甲醇内标液组成；所述提取液为体积比为5:1的甲基叔丁基醚/甲醇溶液；(2)定性检测采用UPLC‑Triple‑TOF‑MS/MS测定待测样品，通过对比样品中保留时间/一级质谱和二级质谱信息，确定样品中是否含有目标磷脂成分，然后按峰面积归一化法求得各成分的相对质量百分含量；UPLC检测在超高效液相色谱仪上进行，进样量为6μL，流动相包括A相和B相，其中A相为乙酸铵在水/乙腈混合溶剂中形成的混合溶液，乙酸铵在混合溶液里的浓度为10mM；B相为乙酸铵在乙腈/异丙醇混合溶剂中形成的混合溶液，乙酸铵在混合溶液里的浓度为10mM；流动相的流速为0.3mL/min，柱温为50℃；MS/MS检测在质谱仪上进行，正离子检测质谱条件：离子源喷雾电压为5500V，离子源温度为550℃，解簇电压为100V，离子源气体1和2的气压均为60psi，气帘气压强为30psi，扫描范围为200～1000u；负离子检测质谱条件：离子源喷雾电压为‑4500V，离子源温度为400℃，解簇电压为100V，离子源气体1和2的气压均为60psi，气帘气压强为35psi，扫描范围为500～1000u。