[发明专利]一种苹果果实石蜡切片快速制作方法

摘要

本发明提供一种苹果果实石蜡切片快速制作方法，包括样本固定、样本脱水、透明处理、样本包埋、样本切片、摊片处理和组织染色等步骤，通过摊片处理过程，降低石蜡切片中水和石蜡的表面张力，使细胞组织边界处产生一定的水相薄层，突出了细胞组织结构，易于在边界染色，从而简化了现有技术中植物果实石蜡切片的制作方法，使苹果果实石蜡切片制作无需再进行切片后的脱蜡、复水，以及染色后的脱水、透明等操作步骤，使切片制作时间由原来1周左右时间减少至目前不超过2天，显著缩短了制作周期，提高了制作效率，同时还能够充分保证切片质量，降低制备成本，为果树栽培技术领域细胞学和原位杂交基因表达检测等方面的科学研究提供技术支持。

主权项

1.一种苹果果实石蜡切片快速制作方法，其特征在于，由以下步骤组成：步骤1、样本固定：切取待检验苹果果实样本，使用固定液快速固定至少24h；步骤2、样本脱水：对步骤1固定好的所述苹果果实样本用不同浓度乙醇进行逐级脱水，脱水浓度梯度依次为50%→70%→85%→95%→100%→100%，每级脱水时间均为1h；步骤3、透明处理：对步骤2脱水后的所述苹果果实样本用二甲苯乙醇及二甲苯溶液进行透明处理，处理浓度梯度依次为二甲苯乙醇溶液（二甲苯︰乙醇=1︰1）→二甲苯→二甲苯，每级处理时间均为1h；步骤4、样本包埋：对步骤3透明后的所述苹果果实样本进行经二甲苯与石蜡在65℃混合液到两次纯蜡的浸蜡处理，即：二甲苯与石蜡混合液（二甲苯︰石蜡=1︰1）65℃过夜浸蜡→65℃开盖使二甲苯挥发2h→纯石蜡浸蜡2h→纯石蜡浸蜡2h→组织包埋机包埋；步骤5、样本切片：对步骤4完成包埋的所述苹果果实样本进行切片处理，经修蜡后使用切片机进行切片，切片厚度为10～15µm；步骤6、摊片处理：对步骤5完成切片的所述苹果果实样本进行摊片处理，将所述苹果果实切片使用水浴锅40℃水浴展片后，平展置于载玻片固定位置，使用摊片机在38～45℃静置摊片2h；步骤7、组织染色：对步骤6摊片处理后的所述苹果果实样本进行组织染色，使用浓度1%的甲苯胺蓝对所述苹果果实样本进行染色，染色2～5min；步骤8、封片处理：对步骤7染色后的所述苹果果实样本进行封片处理，将染色样本使用蒸馏水冲洗干净后，晾干后使用少量中性树胶进行封片处理，完成所述苹果果实石蜡切片的制作。