[发明专利]一种铅笔绘制双极电极纸芯片甲胎蛋白免疫传感器的制备方法

摘要

本发明公开了一种铅笔绘制双极电极纸芯片甲胎蛋白免疫传感器的制备方法，属于生物传感器领域。本发明在纸基基底上利用铅笔绘制驱动电极和双极电极，双极电极的阴极首先修饰石墨烯，然后通过戊二醛固定甲胎蛋白一抗，钯金/多壁碳纳米管复合物标记二抗，利用夹心免疫方式识别捕获甲胎蛋白，制得低成本、操作简单及背景干扰小的铅笔绘制双极电极纸芯片甲胎蛋白免疫传感器。

主权项

1.一种铅笔绘制双极电极纸芯片甲胎蛋白免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤为：（1）在计算机上利用Adobe illustrator软件设计双极电极纸芯片的亲疏水蜡打印图案，如附图1所示；（2）将步骤（1）中设计的打印图案通过蜡打印机打印在色谱纸上，随后将打印过的A4色谱纸放置到平板加热器或烘箱中，在100 ºC下加热100 s，使蜡融化并浸透整个纸的厚度，形成疏水墙；（3）将步骤（2）中获得的纸芯片通过铅笔绘制驱动电极；（4）将步骤（3）中获得的纸芯片双极电极区域利用6B铅笔绘制，双极电极绘制后碾磨平整；（5）将步骤（4）中获得的纸芯片双极电极阴极区域滴加20 μL 0.2~1.0 mg/mL石墨烯及2.0 mg/mL壳聚糖混合液，依次滴加10 μL 1%戊二醛，10~20 μL 10 μg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液，孵育20~30分钟，然后滴加10 μL 2%牛血清白蛋白封闭活性位点，孵育30分钟，用超纯水清洗三次；（6）将步骤（5）中处理过的纸芯片双极电极阴极区域滴加10 μL 50 pg/mL ~500 ng/mL的一定量甲胎蛋白标准溶液，孵育20~30分钟，用超纯水清洗三次；（7）将甲胎蛋白二抗固载于钯金与多壁碳纳米管复合材料（Ab2/PdAu/ MWCNTs），10 μL 10~30mg/mL二抗复合物溶液滴加至步骤（7）中处理过的双极电极阴极区域，室温孵育20~30分钟，用超纯水清洗三次，制得甲胎蛋白双极电极纸芯片电致化学发光传感器；（8）将步骤（7）中得到的纸芯片双极电极阳极区域信号池内加入50 μL 0.1mol/L的磷酸缓冲溶液含有2.0~5.0 mmol/L 三联吡啶钌Ru(bpy)32+和30~50 mmol/L 三丙胺TPA，纸芯片双极电极阴极区域反应池内滴加50 μL 30~50 mmol/L的H2O2溶液，在驱动阴极和驱动阳极间施加4.0~6.0 V电压，测定信号池电致发光强度。