[发明专利]一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法有效
| 申请号： | 201811178904.8 | 申请日： | 2018-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN109295010B | 公开（公告）日： | 2021-04-02 |
| 发明（设计）人： | 叶建强;任丹;李拓凡;邵红霞;秦爱建;高巍;张鑫宇 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N7/02;C12N5/071 |
| 代理公司： | 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 | 代理人： | 沈志海 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，包括以下步骤：（1）细胞培养：将鸡肝细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM‑F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒：将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml含体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于‑80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含体积浓度为2%胎牛血清的培养基。本发明利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，利用病毒复制速率显著高于DF‑1细胞和BHK‑21细胞的鸡肝细胞来扩增坦布苏病毒。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 肝细胞 进行 坦布苏 病毒 高效 扩增 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）细胞培养将鸡肝细胞用含胎牛血清的DMEM‑F12培养基进行培养，胎牛血清体积浓度为10%，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于‑80℃冰箱备用，同时每孔补200μl体积浓度为2%胎牛血清的培养基。
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