[发明专利]一种动物肝脏内乙酰辅酶A的液质联用测定方法

摘要

本发明公开了一种动物肝脏内乙酰辅酶A的液质联用测定方法，具体是先取新鲜动物肝脏，并将肝脏内血液冲洗干净，然后将肝脏样本与前处理液混合后匀浆，制得组织匀浆液，在匀浆液中加入内标，混和均匀后离心，取上清液作为待测样品，最后将样品送入液相色谱‑质谱联用检测仪进行检测，采集数据，经标准曲线回归计算，得到动物肝脏内乙酰辅酶A的浓度；其中，所述前处理液是含有二硫苏糖醇和苯甲基磺酰氟的高氯酸水溶液。与现有的酶联免疫标记法，本发明采用的液质联用方法快速、可靠，操作步骤简化，适合批量测定肝脏内乙酰辅酶A的含量。

主权项

1.一种动物肝脏内乙酰辅酶A的液质联用测定方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，样本获取，取新鲜动物肝脏，并将肝脏内血液冲洗干净；步骤2，样本前处理，将步骤1的肝脏样本与前处理液混合后匀浆，制得组织匀浆液，在匀浆液中加入内标，混和均匀后离心，取上清液作为待测样品；步骤3，样本测定，将步骤2的样品送入液相色谱‑质谱联用检测仪进行检测，采集数据，经标准曲线回归计算，得到动物肝脏内乙酰辅酶A的浓度；其中，所述前处理液是含有二硫苏糖醇和苯甲基磺酰氟的高氯酸水溶液；步骤3中液相色谱‑质谱联用检测仪的检测条件具体如下：液相色谱条件：C18色谱柱，流动相A为0.1%甲酸的水溶液，流动相B为乙腈，柱温40℃，流速0.8 mL/min, 梯度洗脱，初始流动相为流动相A和流动相B按体积比95%：5%保持0.5 min，在0.5 min内流动相B升高为70%，并在此条件下保持2.0 min，其后在0.5 min内流动相B降为5%，保持0.5 min，总采集时间为4 min；质谱条件：离子源为电喷雾离子源，正离子模式，扫描类型为选择反应监测或多级反应监测，离子源喷雾电压为4500V，离子传输管温度为350℃，雾化气和辅助气分别为40和20 Arb，氩气压力设定为1.0mTorr，扫描时间为0.2s，定量方式为内标法，定量分析的离子对分别为：乙酰辅酶A，810→303，内标，地西泮，285→193，碰撞能量均为31eV。