[发明专利]一种鉴定转基因青蒿基因型的ddPCR检测方法在审
| 申请号： | 201811189026.X | 申请日： | 2018-10-12 |
| 公开（公告）号： | CN109182472A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 吴潇;唐雪明;沈乾;唐克轩;白蓝;吕贝贝;蒋玮;王金斌;刘华;武国干;李鹏 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 张晓敏;费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种鉴定转基因青蒿基因型的ddPCR检测方法，提取待测样品的DNA作为模板，将内参基因引物对和探针、外源基因的引物对和探针加入到扩增反应体系中，进行ddPCR扩增反应；反应过程：95℃预变性10min；94℃变性15‑30s，58‑62℃退火1min，35‑45个循环；98℃固化10min；扩增结束后，得到内参基因和外源基因的拷贝数，判断待测样品为转基因杂合型。本发明中，采用双通道微滴数字PCR技术，以青蒿GEL4基因作为内标基因，建立了Epsps转基因青蒿纯合子的鉴定方法，可以同时对转基因青蒿幼苗整合型进行快速鉴定，准确率为100％。 | ||
| 搜索关键词： | 转基因青蒿 待测样品 外源基因 基因型 种鉴定 探针 退火 扩增反应体系 内参基因引物 快速鉴定 扩增反应 内标基因 内参基因 数字PCR 青蒿 纯合子 拷贝数 双通道 预变性 杂合型 整合型 转基因 检测 准确率 变性 扩增 微滴 引物 幼苗 固化 基因 | ||
【主权项】：
1.一种鉴定转基因青蒿基因型的ddPCR检测方法，包括以下步骤：1)提取待测样品的DNA作为模板，模板浓度10～100ng/μL；2)将内参基因引物对和探针、外源基因的引物对和探针加入到扩增反应体系中，进行ddPCR扩增反应；反应过程：95℃预变性10min；94℃变性15‑30s，58‑62℃退火1min，35‑45个循环；98℃固化10min；3)扩增结束后，分别得到内参基因和外源基因的拷贝数，当内参基因拷贝数：外源基因拷贝数＝0.8‑1.2：1时，待测样品为转基因纯合型，当内参基因拷贝数：外源基因拷贝数＝1.8‑2.2：1时，待测样品为转基因杂合型。
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