[发明专利]一种黄瓜褐斑病抗性育种方法

摘要

本发明提供了一种黄瓜褐斑病抗性育种方法，属于果蔬育种领域。该方法的技术路线包括：1）育种材料的选取；2）将待改良黄瓜品种与黄瓜褐斑病抗源品种杂交；3）对选取的待改良黄瓜品种和黄瓜褐斑病抗源品种分别进行花药诱导培养；对选取的待改良黄瓜品种和黄瓜褐斑病抗源品种分别进行花药诱导培养；4）粗毒素浓缩液的提取；5）粗毒素筛选压的鉴定；6）F1代杂交种花药培养，粗毒素筛选后获得再生植株；7）炼苗移栽；8）褐斑病抗性鉴定与后代筛选。本发明的方法提高了黄瓜褐斑病筛选效率，显著缩短抗病育种周期，大大加快了黄瓜褐斑病抗病育种进程。

主权项

1.一种黄瓜褐斑病抗性育种方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1）育种材料的选取选择农艺和产量性状优良但褐斑病抗性不足的当地黄瓜主栽品种作为待改良黄瓜品种，选择黄瓜种质资源库中经褐斑病抗性鉴定表现为高抗的黄瓜品种作为黄瓜褐斑病抗源品种；正季种植待改良黄瓜品种和黄瓜褐斑病抗源品种；2）将待改良黄瓜品种与黄瓜褐斑病抗源品种杂交以步骤1）正季种植的待改良黄瓜品种为母本，黄瓜褐斑病抗源品种为父本进行杂交，获得F1代杂交种；3）对选取的待改良黄瓜品种和黄瓜褐斑病抗源品种分别进行花药诱导培养在黄瓜初花期，采集小孢子发育时期为单核靠边期的待改良黄瓜品种和黄瓜褐斑病抗源品种的花蕾，将花蕾用湿润的纱布包裹后置于4℃低温预处理48h，然后对花蕾进行消毒，在无菌条件下剥取花药接种于诱导培养基上，在特定的培养条件下分别诱导出愈伤组织；4）粗毒素浓缩液的提取将瓜棒孢霉菌菌种转接到PDA培养基上，置于25℃恒温培养箱中扩繁7天；接种5个直径约4mm的菌饼到250mLPS培养液中，28℃摇床振荡培养14天获得菌液；把获得的菌液进行过滤，得到的滤液在60℃下进行旋转蒸发直至滤液到达原体积的1/10，以4500r/min在离心机中进行离心去沉淀，将获得的上清液加入等体积的乙醚进行萃取，重复3次，合并3次的乙醚萃取相，在旋转蒸发仪上45℃进行旋转蒸发去除乙醚，获得的浆状物加水定容至1mL 即为粗毒素浓缩液，置于4℃冰箱保存；5）粗毒素筛选压的鉴定将粗毒素浓缩液进行稀释，配成不同浓度的粗毒素稀释液，并添加到制备好的花药分化培养基中，使分化培养基含有梯度浓度的粗毒素，然后将步骤S2中获得的待改良黄瓜品种和黄瓜褐斑病抗源品种的愈伤组织分别转接到上述分化培养基上，在温度23‑27℃、光照强度1500‑2000Lx、每天光照12‑14h的条件下进行培养，筛选出二者愈伤组织分化率均在2.0%左右的分化培养基对应添加的粗毒素浓度，将两个粗毒素浓度的平均值作为黄瓜花药分化培养粗毒素筛选压；6）F1代杂交种花药培养，粗毒素筛选后获得再生植株正季种植F1代杂交种，待植株进入初花期时，选取长势良好的植株进行花药诱导培养，操作方法与步骤2）相同，将获得的愈伤组织转接到添加了褐斑病粗毒素筛压的分化培养基上进行培养，分化培养基配方与培养条件与步骤4）相同，获得不定芽；当分化出的不定芽长成2‑4cm高的芽苗后转接到生根培养基上，在温度26‑28℃、光照强度2400‑2800Lx、每天光照14‑16h的条件下培养26‑34d，获得花培再生植株；7）炼苗移栽当花培再生植株根系长至4‑6条，根长3‑5cm时，将其移至温室中利用自然光照进行炼苗，不打开瓶盖炼苗3d，打开瓶盖炼苗5d；然后将花培苗从瓶内移出，洗净附着在根部的培养基后移栽入基质中，在适宜的条件进行常规栽培管理；8）褐斑病抗性鉴定与后代筛选将成熟的黄瓜花培苗进行单株收种获得不同花培家系，进一步栽培后，对其抗病性进行接种鉴定，筛选出褐斑病高抗且农艺和产量性状与育种主干亲本相近的单株，再经1‑2 代系谱选择即获得黄瓜褐斑病抗性新品系。