[发明专利]一种水山药中多酚氧化酶的提取工艺有效
| 申请号： | 201811199611.8 | 申请日： | 2018-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN108866018B | 公开（公告）日： | 2019-02-05 |
| 发明（设计）人： | 彭新颜;于海洋;黄萍萍;于会同;付丽;刘媛 | 申请（专利权）人： | 鲁东大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 马国冉 |
| 地址： | 264025 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种水山药中多酚氧化酶的提取工艺。步骤包括：取新鲜水山药加入磷酸缓冲液，再加入纤维素酶、PVPP、Triton X‑100和PEG6000后匀浆，冰浴浸提，冷冻离心，收集上清液即为山药多酚氧化酶粗酶液；将多酚氧化酶粗酶液置于冰浴中，缓慢加入硫酸铵，至30%的饱和度，去沉淀留上清液；继续加入硫酸铵至80%的饱和度，离心收集沉淀；将沉淀经透析处理后，离心截留分子量大于10 kDa的粗酶液，经纯化后得多酚氧化酶提取物。本申请以极易产生褐变的水山药为材料，提取并纯化山药中的多酚氧化酶。本申请山药多酚氧化酶的分子量约为32 kDa，达到了电泳纯。 | ||
| 搜索关键词： | 多酚氧化酶 山药 粗酶液 水山药 饱和度 硫酸铵 上清液 冰浴 沉淀 离心收集沉淀 截留分子量 磷酸缓冲液 冷冻离心 生物提取 透析处理 纤维素酶 电泳纯 提取物 新鲜水 褐变 浸提 匀浆 申请 | ||
【主权项】：
1.一种水山药中多酚氧化酶的提取工艺，其特征在于，步骤包括：（1）取新鲜水山药加入pH 6.0的磷酸缓冲液，再加入纤维素酶、PVPP、Triton X‑100和PEG6000后匀浆，浸提2‑6h，然后冷冻离心，收集上清液即为山药多酚氧化酶粗酶液；所述磷酸缓冲液、纤维素酶、PVPP、Triton X‑100和PEG6000的用量如下：每克新鲜水山药配置1‑1.2毫升磷酸缓冲液；每克新鲜水山药配置0.01‑0.015克纤维素酶；每克新鲜水山药配置0.02‑0.03毫克PVPP；每克新鲜水山药配置0.01‑0.02毫克Triton X‑100；每克新鲜水山药配置0.01‑0.03毫克PEG 6000；（2）将多酚氧化酶粗酶液分级沉淀后，离心收集沉淀；将沉淀经透析处理后，转移到超滤离心管中进行离心，5000 r/15 min，截留分子量大于10 kDa的粗酶液，最后经纯化后得到多酚氧化酶提取物；所述透析处理为：将沉淀置于透析袋中，在超纯水中透析3次，每次间隔3~5h；然后用0.1mol/L磷酸缓冲液透析两次，每次间隔6‑8h。
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