[发明专利]一种外周血来源单个核细胞的分离及诱导培养方法在审
| 申请号： | 201811208217.6 | 申请日： | 2018-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN109402053A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 黎天英 | 申请（专利权）人： | 广州元帅生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 胡辉 |
| 地址： | 510520 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种外周血来源单个核细胞的分离及诱导培养方法，属于生物技术的细胞培养领域。所述方法包括：采集外周血，得到外周血来源单个核细胞；将细胞接种到包含RetroNectin和CD3Mab的培养器皿中，加入无血清细胞培养基培养。本发明无血清细胞培养基包含谷氨酰胺、巯基乙醇和IFN‑γ，以及转铁蛋白、胰岛素、丙酮酸钠、胆固醇，可以促进单个核细胞大量扩增，获得足够数量的外周血来源单个核细胞。本发明同现有技术相比，采用先包被RetroNectin和CD3抗体，后加入INF‑γ、IL‑2以及SUPERGROW细胞培养添加物，通过包被使得细胞更持久的接触抗体，用量少、激活效果更好。 | ||
| 搜索关键词： | 单个核细胞 外周血 无血清细胞培养基 诱导培养 包被 细胞培养 细胞培养添加物 丙酮酸钠 谷氨酰胺 培养器皿 细胞接种 转铁蛋白 巯基乙醇 胰岛素 胆固醇 抗体 扩增 生物技术 采集 激活 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种外周血来源单个核细胞的分离及诱导培养方法，其特征在于：包括下列步骤：无菌采集外周血，进行抗凝处理；加入淋巴细胞分离液，500×g～1500×g离心5‑15min，取上层血浆和白膜层；再400×g～800×g低速离心5‑15min，得到细胞沉淀；将细胞接种到培养器皿中，所述培养器皿有包含RetroNectin和CD3Mab的缓冲液；加入无血清细胞培养基，所述无血清细胞培养基的成分包括1～10mmol/L谷氨酰胺、30～70μmol/L巯基乙醇、500～1500u/mL的IFN‑γ、0～800μ/ml转铁蛋白、0～800μ/ml胰岛素、0～800μ/ml丙酮酸钠、0～5μg/ml胆固醇；进行培养；第0天加入500～1500u/mLIFN‑γ、2～6％的SUPERGROW细胞培养添加物，24h后加入500～1500u/mL IL‑2、2～6％SUPERGROW细胞培养添加物；适时转移细胞到新的培养器皿中，并补充无血清细胞培养基、IL‑2以及SUPERGROW细胞培养添加物。
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