[发明专利]一种人工授粉组培技术及栽培繁育秦岭野生金钗石斛的方法

摘要

本发明公开了一种人工授粉组培技术及栽培繁育秦岭野生金钗石斛的方法，通过金钗石斛人工栽培，促使开花，进行人工授粉，培育石斛蒴果，石斛蒴果进行组培生产技术及栽培方法，提高金钗石斛种苗的扩繁速度、提高有效成份含量，提高炼苗和移栽成活率，尽快实现金钗石斛的规范化、规模化发展，特别是对细胞分裂素和生长素的使用比例和有机添加物筛选和用量，以及消毒方法针对金钗石斛特殊的生长习性，进行了多次研究和试验，获得了独创的培养配方和培养方法；又解决了金钗石斛组培苗的炼苗、移栽方法，完成了金钗石斛的组培生产技术及栽培方法的发明研究。

主权项

1.一种人工授粉组培技术及栽培繁育秦岭野生金钗石斛的方法，其特征在于：(1)金钗石斛组培生产技术分为三个阶段；A、种子培养：将野生石斛进行人工栽培，针对多年生野生石斛进行人工授粉，提高坐果率；新鲜的未裂开的果实或储存的种子经过消毒处理程序，播入MS基本培养基+NAA(α‑萘乙酸)0.25mg/L+6‑BA(6‑苄基腺嘌呤)3.0mg+IBA0.15mg+杂木屑20％(V/V)+琼脂5g/L的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度22～25℃，每日光照10‑‑12小时，光强1800～2500lx，15～20天种胚开始萌动，25～30天种胚膨大，逐渐萌发形成绿色的原球茎；B、茎尖培养：取金钗石斛当年萌发的嫩茎尖，用0.1％升汞消毒10分钟，无菌水冲洗5次后，再用碘伏浸泡1分钟，接种到培养基上，培养温度为25‑28℃，光照度1600‑2000lx，每天8‑10小时，研究结果表明MS+NAA0.25+6‑BA3.0mg+IBA0.10mg+松树皮20％(g/v)培养30天左右，外植体则可分化出大小不一的颗粒状愈伤组织，再经20天培育形成原球茎；再将原球茎转入ms基本培养基+6‑BA(6‑苄基腺嘌呤)0.2mg/L+IBA2.5mg+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L培养基里进行原球茎增殖、分化培养，约25天可观察到瓶内原球茎重叠堆积在培养基中，此时再一次进行转接，后让其分化小苗，苗高1cm左右同时伴随有部分新的原球茎产生；C、将小苗转入ms基本培养基+NAA(α‑萘乙酸)0.2mg/L+6‑BA3.0mg+IBA0.25mg+香蕉汁10％(V/V)+土豆汁10％(V/V)+琼脂6g/L的培养基里，进行壮苗培养，2个月可观察到小苗发育成2.5～4cm的中苗，将3cm以下的中苗再转接到同样的培养基里，继续培养，3cm以上的大苗进入生根培养基中培养，2个月可培养出5cm高以上的大苗，大苗可出瓶炼苗、移栽；(2)炼苗、移栽基质应用技术：本发明的关键就是金钗石斛炼苗基质和移栽基质的选择，根据金钗石斛特殊的生长习性和特点，采用种子繁殖，每粒种子萌发苗可达10万株以上。其组培苗通过炼苗再移栽的基质运用技术，既保证了植株根系的透水、透气性，又具备保温性和肥力，使金钗石斛组培苗人工栽培的成活率达到97％以上；A、炼苗基质：由于金钗石斛组培苗是在无菌、恒温、高湿等条件下培养而成。因此，组培苗出瓶炼苗是金钗石斛产业化关键环节。本发明采用鹅卵石+锯木屑+松树皮+腐熟有机肥的羊粪，厚度比为4cm∶4cm∶1cm，主要解决瓶中组培苗到移栽大田的过渡适应期，既要保证植株根部的透水、透气性，又要具有保湿性强、肥力好、不易滋生病虫害的要求，随时保证合理的水分、温湿度、光照控制，这样能使金钗石斛组培苗炼苗成活率达到97％以上，而且植株生长良好；B、移栽基质：金钗石斛组培苗经12个月炼苗后，已经从组培室无菌环境自然过渡到栽培大棚新的生长环境，这时的植株已较为健壮，生长稳定，可移栽到佛坪各乡镇适宜栽种石斛的区域。通过对野生金钗石斛原生态生长环境的深入调研，通过研究和创新，采碎砖块+松树皮+粗木屑+活苔藓盖根法，并且植株生长良好；(3)金钗石斛的采收：金钗石斛组培苗按本发明所用的方法经炼苗、移栽后，经3年即可采收。采收期以每年的入冬为宜，采收前1.5个月应停止给植株施肥和用药。采收时应将生长期2.5年～3年生长的老茎剪下，新芽及根部保留，这样可连续采收6年以上；上述的金钗石斛的工厂化生产技术及栽培方法中，所提到的对于金钗石斛各生长过程培养基质的配方是：(1)种胚诱导及壮苗生根培养基：ms基本培养基+NAA(α‑萘乙酸)0.3mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/；(2)原球茎增殖与分化培养基：ms基本培养基+BA(6‑苄基腺嘌呤)0.2mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L；(3)壮苗培养基：ms基本培养基+NAA(α‑萘乙酸)0.2mg/L+6‑BA3.0mg香蕉汁10％(V/V)+土豆汁10％(V/V)+琼脂6g/L。