[发明专利]一种秦岭石蝴蝶试管内叶插快繁体系的建立方法

摘要

本发明公开了一种秦岭石蝴蝶试管内叶插快繁体系的建立方法，包括外植体叶片的消毒和接种、叶插增殖培养以及生根壮苗培养三个步骤，培养过程中使用基础培养基，以及附加MS营养液及激素的具体培养基，首先将作为外植体的叶片经过擦拭、震荡洗涤、冲洗及灭菌去离子水冲洗后叶炳端朝下斜插入基础培养基中，从叶柄基部添加增殖培养液诱导不定芽形成，最后将形成的不定芽丛分为单株后转入基本培养基，从单芽根部添加生根壮苗培养液进行生根壮苗。本发明通过组织培养技术实现了秦岭石蝴蝶的叶插快繁培养，增殖系数高，能够克服自然繁殖方式较慢的特点，在短时间内获得大量遗传性状稳定一致的优质种苗，对秦岭石蝴蝶快速繁育与种质资源保护具有积极意义。

主权项

1.一种秦岭石蝴蝶试管内叶插快繁体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)叶片的消毒及接种：从秦岭石蝴蝶母株上摘取健康的带柄叶片为外植体材料，对外植体材料进行清洗和消毒，然后将外植体材料无菌操作下叶柄端朝下斜插入基础培养基中，所述基础培养基由一定体积比的珍珠岩、蛭石和泥炭加水混均后于121.3℃下灭菌60min制得；(2)叶插增殖培养：从步骤(1)中斜插入基础培养基的外植体材料的叶柄基部向培养基中添加增殖培养液，诱导不定芽的形成，所述增殖培养液为MS营养液+IBA，所述IBA浓度为100～600mg/L，pH值为5.8；(3)生根壮苗培养：将步骤(2)中得到的不定芽丛分为单株，挑选芽体大于2cm且带有3～5片叶的单株转入基础培养基，从单芽基部向基础培养基中加入生根壮苗培养液进行生根壮苗，所述生根壮苗培养液为MS营养液+IBA，所述IBA浓度为200mg/L，pH值为5.8。