[发明专利]一种细胞分裂素通过抑制DNA聚合酶活性抑制细胞增殖的方法

摘要

本发明提供了一种细胞分裂素通过抑制DNA聚合酶活性抑制细胞增殖的方法，属于生物化学与分子生物学技术领域。在PDB数据库里找到我们所用的DNA聚合酶，设置参数对DNA聚合酶的结构进行优化；然后寻找DNA聚合酶的活性位点；准备BAR结构式并进行优化；LibDock的方法进行分子对接，可依次查看每个配体的对接结构，按照打分函数进行排序。本发明的数据建立在细胞分裂素可干扰肿瘤细胞中DNA聚合酶生物催化合成DNA从而抑制肿瘤细胞的存活和增殖的基础之上。

主权项

1.一种细胞分裂素通过抑制DNA聚合酶活性抑制细胞增殖的方法，其特征在于，步骤如下：(1)细胞培养：将人肺癌细胞株A549悬浮于含有灭活血清的无菌的DMEM培养液中，置于浓度为5％CO2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中培养，待细胞贴壁长至培养瓶底面积的70％～80％传代1次；(2)药物配制：BAR用分别0.1％DMSO溶解，继续用无菌DMEM培养基将溶解好的oTR稀释至浓度为0.1μM‑30μM，过滤除菌，室温保存；(3)处理细胞：将步骤(1)中处于对数生长期的细胞用胰酶消化，细胞计数后，稀释，稀释细胞密度为3×104～5×104个/ml，吹打混匀，将细胞接种于96孔板中，每孔取100μl人肺癌细胞株A549，12h后，待细胞贴壁后，设置7组实验，每组4个复孔，第1组：空白对照组；第2组：100μΜBAR组；第3组：20μM BAR组；第4组：10μΜBAR组；第5组：2μΜBAR组；第6组：1μΜBAR组；第7组：0.2μΜBAR组；分别向各组中加入10μl对应的药物，轻轻混匀后，置于浓度为5％CO2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育2天，检测细胞增殖抑制活性；(4)生物信息学检测BAR对DNA聚合酶的影响：首先，在PDB数据库里找到我们所用的DNA聚合酶，设置参数对DNA聚合酶的结构进行优化；然后寻找DNA聚合酶的活性位点；准备BAR结构式并进行优化；LibDock的方法进行分子对接，可依次查看每个配体的对接结构，按照打分函数进行排序。