[发明专利]一种CD3E基因修饰人源化动物模型的构建方法

摘要

本发明在BALB/c背景上，通过BAC转基因技术将人源CD3E及其完整的调控序列插入小鼠基因组中，建立hCD3E转基因小鼠模型。该模型适用于结直肠癌、肝癌、黑色素瘤、乳腺癌、肾癌及淋巴癌的药物筛选，极大拓展了双特异性抗体的筛选类型。通过优化步骤，极大提高了hCD3E转基因小鼠模型的制备成功率，目前已成功获得了稳定遗传的小鼠line。该line小鼠可实现人源CD3E(hCD3E)及鼠源CD3e(mCD3e)共表达；同时CD3E人源化的小鼠免疫系统健全，为国际及国内市场CD3E‑TCB临床用药物研发提供数据，填补了市场空白。

主权项

1.一种CD3E基因修饰人源化动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)通过PCR扩增制备FRT‑Neo‑FRT片段；(2)将含有人源CD3E及其调控序列的BAC载体转入大肠杆菌，所述BAC载体中保留了人源CD3E基因的调控区域，保证了人源CD3E表达受人类自身启动子和调控序列控制；(3)将步骤(1)制备的FRT‑Neo‑FRT片段电转化入含有步骤(2)所得的大肠杆菌，经鉴定获得含有人源CD3E基因和FRT‑Neo‑FRT片段的载体hCD3E‑BAC‑FRT‑Neo‑FRT；(4)去除hCD3E‑BAC‑FRT‑Neo‑FRT上的Neo基因，进行鉴定确认，获得最终的打靶载体；(5)采用DNA原核显微注射发法，将构建好的携带人源CD3E序列的打靶载体注射入小鼠受精卵中，移植入受体母鼠生产CD3E基因修饰人源化动物模型。