[发明专利]一种预防高蛋白质含量基质成冻的前处理方法

摘要

本发明公开了一种预防高蛋白质含量基质成冻的前处理方法，所述方法是对中华人民共和国国家标准GB/T 22286‑2008、GB/T21313‑2007中的提取步骤进了改进，在提取时加入缓冲盐溶液后，步骤不变，但在酶解步骤时，加入C₁₈粉、硫酸锌，滴加几滴氢氧化钠溶液，再离心，取上清液，可以将蛋白胶体解冻或者将大量蛋白沉淀。或者是在提取时不选择使用缓冲盐溶液，而是直接用三氯乙酸溶液提取，同时行酶解步骤，能够有效解决上清液会成胶体状态或者是融化胶体状态，无法按照标准进行取上清液和调pH的步骤，从而造成检测结果不准确甚至检测无法进行的问题。

主权项

1.一种预防高蛋白质含量基质成冻的前处理方法，其特征在于，所述方法应用在中华人民共和国国家标准GB/T 22286‑2008中，所述方法具体为：(1)称取2g经捣碎的样品于50ml离心管中，加入8ml乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加50μLβ‑葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶以及1g C18粉、120g/L硫酸锌溶液2mL，滴加3.5滴1mol/L氢氧化钠溶液，混匀后，37℃水浴振荡水解12h；(2)添加100μL 10ng/ml的内标工作液于待测样品中，加盖置于水平振荡器振荡15min，离心10min，取4ml上清液加入0.1mol/L高氯酸溶液5ml，混合均匀，用高氯酸调节pH值到1±0.3，10000r/min冷冻离心10min后，将全部上清液转移到50ml离心管中，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11，加入10ml饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇‑乙酸乙酯混合溶液，充分提取，在10000r/min下冷冻离心10min。