[发明专利]一种建兰与火焰兰属间杂交培育兰花新品种的方法

摘要

本发明公开了一种建兰与火焰兰属间杂交快速高效培育兰花新品种的方法。该方法包括花粉收集及保存、人工授粉及杂交果实培育、杂种胚培养发育为根状茎、根状茎增殖培养、根状茎分化培养、不定芽生根成苗培养以及成苗移栽及栽培等步骤。本发明利用低温保存且无菌的具有活力的花粉解决兰花属间杂交花期不遇的瓶颈问题，利用胚拯救培养技术解决属间远缘杂交杂种胚发育不良的关键问题，通过单个杂种胚无菌培养发育为根状茎后进行相对应的根状茎克隆增殖培养，避免传统杂交育种年限长的缺点，可快速培育出兰花新品种。

主权项

1.一种建兰与火焰兰属间杂交快速高效培育兰花新品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)花粉收集及保存：在父本火焰兰单花花瓣刚展开时，应用灭菌的挑取工具挑掉兰花的药帽，再用灭菌的挑取工具将兰花花粉块挑至洁净无菌的容器中密封好，置于4～6℃避光保存；(2)人工授粉及杂交果实培育：当母本建兰开花时，将步骤(1)保存的花粉块在室温条件下解冻20～30min，然后再加入无菌水进行回湿处理20～30min，得到具有活力的花粉；将具有活力的花粉授粉于母本建兰的花朵柱头上，进行杂交蒴果的培育；(3)杂种胚培养发育为根状茎：当杂交蒴果发育至180～200天，采摘杂交果实，经消毒后切开杂交果实，将粉末状杂种胚接种至胚拯救培养基中进行无菌培养得到根状茎，所述的胚拯救培养基每升含硝酸铵160～200mg、磷酸二氢钾80～100mg、氯化钾160～200mg、硫酸镁80～100mg、硝酸钙80～100mg、硫酸锌1～3mg、硼酸1～3mg、硫酸锰0.1～0.5mg、硫酸铜0.03～0.05mg、氯化镍0.03～0.05mg、碘化钾0.01～0.05mg、硫酸亚铁16～20mg、维生素C 30～50mg、烟酸8～10mg、盐酸硫胺素3～5mg、盐酸吡哆醇0.3～0.5mg、谷氨酸0.3～0.5mg、钴胺素0.5～1mg、6‑苄基嘌呤0.05～0.1mg、萘乙酸0.2～0.5mg、椰子汁50～100mL、香蕉泥50～80g、蔗糖15～30g、琼脂6～7g，余量为水，pH 5.4～5.6；(4)根状茎增殖：将步骤(3)得到的单个根状茎转移至增殖培养基中进行克隆增殖培养得到遗传稳定一致的根状茎群体，所述的增殖培养基每升含硝酸铵160～200mg、磷酸二氢钾80～100mg、氯化钾160～200mg、硫酸镁80～100mg、硝酸钙80～100mg、硫酸锌1～3mg、硼酸1～3mg、硫酸锰0.1～0.5mg、硫酸铜0.03～0.05mg、氯化镍0.03～0.05mg、碘化钾0.01～0.05mg、硫酸亚铁16～20mg、维生素C 30～50mg、烟酸8～10mg、盐酸硫胺素3～5mg、盐酸吡哆醇0.3～0.5mg、谷氨酸0.3～0.5mg、钴胺素0.5～1mg、肌醇80～120mg、萘乙酸0.2～2.0mg、苄氨基腺嘌呤0.5～3.0mg、活性炭1～2.0g、香蕉50～150g、蔗糖10～20g、琼脂5～6g，余量为水，pH 5.5～5.7；(5)根状茎分化培养：将步骤(4)得到的根状茎群体转移至分化培养基中进行分化培养，直至根状茎群体分化形成高3～5cm的不定芽，所述的分化培养基每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、香蕉泥50～80g、活性碳50～100mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6‑苄基嘌呤3.0～5.0mg、萘乙酸0.4～0.5mg、蔗糖20～30g、琼脂6～7g，余量为水，pH 5.4～5.6；(6)不定芽生根成苗培养：将步骤(5)得到的不定芽转移至生根壮苗培养基中进行成苗培养，所述的生根壮苗培养基每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥50～60g、活性碳500～1000mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素5～10mg、盐酸吡哆醇0.5～1.0mg、烟酸5～10mg、萘乙酸0.5～1.0mg、蔗糖15～30g、琼脂6～7g，余量为水，pH 5.4～5.6；(7)成苗移栽及栽培：待不定芽长至高5～8cm的成苗时，转移到自然光下炼苗10～20天，然后移入兰石：木屑：树皮体积比为1:1:1的混合基质中培育，得到建兰与火焰兰属间杂交品种。