[发明专利]高产纳豆激酶基因工程菌株的构建方法在审
| 申请号： | 201811258055.7 | 申请日： | 2018-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN109295086A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 张佑红;周文科;田莉;钱泽栋 | 申请（专利权）人： | 武汉工程大学 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N9/56;C12R1/125 |
| 代理公司： | 湖北武汉永嘉专利代理有限公司 42102 | 代理人： | 崔友明;刘洋 |
| 地址： | 430074 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高产纳豆激酶基因工程菌株的构建方法。以纳豆芽孢杆菌基因组为PCR扩增模板，利用PCR技术获得纳豆激酶基因片段；用BamH I和Sma I双酶切纳豆激酶的基因片段和质粒pHT43；纳豆激酶DNA片段与经过双酶切的质粒载体进行酶连接，得到重组载体pHT‑NK；将重组载体pHT‑NK转化枯草芽孢杆菌，筛选阳性重组子，即获得纳豆激酶转基因工程菌株。采用枯草芽孢杆菌缺陷型菌株为宿主细胞，构建纳豆激酶基因工程菌株，采用这样的菌株发酵不仅纳豆激酶产量高，而且发酵产物杂蛋白少，简化后期分离纯化工艺流程，节约生产成本。 | ||
| 搜索关键词： | 纳豆激酶 基因工程菌株 构建 枯草芽孢杆菌 重组载体 双酶切 节约生产成本 纳豆激酶基因 纳豆芽孢杆菌 转基因工程菌 缺陷型菌株 阳性重组子 高产 发酵产物 分离纯化 基因片段 宿主细胞 质粒载体 工艺流程 基因组 杂蛋白 菌株 质粒 发酵 筛选 转化 | ||
【主权项】：
1.高产纳豆激酶基因工程菌株的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1)以纳豆芽孢杆菌基因组为PCR扩增模板，利用PCR技术获得纳豆激酶基因片段；2)用BamH I和Sma I双酶切纳豆激酶的基因片段和质粒pHT43；3)纳豆激酶DNA片段与经过双酶切的质粒载体进行酶连接，得到重组载体pHT‑NK；4)将重组载体pHT‑NK转化枯草芽孢杆菌，筛选阳性重组子，即获得纳豆激酶转基因工程菌株。
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