[发明专利]一种无腺体低棉酚棉花种质的创制方法在审
| 申请号： | 201811271189.2 | 申请日： | 2018-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN109321576A | 公开（公告）日： | 2019-02-12 |
| 发明（设计）人： | 郭小平;张军 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/60 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 张红兵 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种无腺体低棉酚棉花种质的创制方法。本发明提供利用CRISPR‑Cas9系统创造无腺体低棉酚棉花材料的方法。选取特异针对控制棉花腺体发育形成GPGF基因的靶位点sgRNA1、sgRNA2，与Cas9蛋白在棉花内稳定表达，获得无腺体低棉酚棉花。转基因再生植株的无腺体表型可稳定遗传至下一代，且棉酚含量下降明显。该发明的优点在于克服了传统杂交方法创造低酚棉种质资源时间长和不稳定的缺陷，并且不限于棉花的受体品种。 | ||
| 搜索关键词： | 棉酚 腺体 棉花 棉花种质 植物基因工程技术 转基因再生植株 传统杂交 棉花材料 受体品种 稳定表达 稳定遗传 种质资源 靶位点 低酚棉 蛋白 发育 基因 | ||
【主权项】：
1.一种无腺体低棉酚棉花种质的创制方法，其特征包括下列步骤：(1)在陆地棉GoPGF保守区域选择如序列表SEQ ID NO：1所示的Gh_A12G2172基因，序列表SEQ ID NO：2所示的Gh_D12G2351基因共有的靶位点sgRNA1、sgRNA2；所述的sgRNA1、sgRNA2的序列为：sgRNA1：ATTTGGGGTTGGGAATCAT，sgRNA2：TTTCTACGCACTTCGTTCCG；(2)利用PCR将sgRNA1‑guidRNA、sgRNA2‑guidRNA串连，然后通过一步克隆法构建到CRISPR/Cas9载体，得到高效转化载体pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ，该转化载体pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：3所示；(3)利用农杆菌介导的方法转化棉花，得到无腺体低棉酚棉花植株。
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