[发明专利]一种高产γ-氨基丁酸的乳酸菌诱变方法及筛选方法

摘要

本发明公开了一种高产γ‑氨基丁酸的乳酸菌诱变方法及筛选方法，包括以下步骤：选取实验室保存的乳酸片球菌ZY‑6(Weissellaviridescens ZY‑6)为出发菌株，经过活化培养、菌悬液制备、诱变处理、培养得到诱变菌，再经诱变菌发酵培养、γ‑氨基丁酸产生菌初筛、高产γ‑氨基丁酸乳酸菌的复筛挑选出γ‑氨基丁酸产量较高的菌株。本发明方法简单易行，成本低，诱变株产GABA量高且稳定，是乳酸菌获得高效产GABA的一种有效方法，菌种长久保藏、应用前景广阔，而且反应条件温和，以L‑谷氨酸或L‑谷氨酸钠为唯一底物，转化液中无其他培养基成分，利用乳酸菌可能存在的谷氨酸脱羧酶，将底物L‑谷氨酸或L‑谷氨酸钠转化为γ‑氨基丁酸，通过纸层析分析转化液中是否存在GABA，提高筛选效率。

主权项

1.一种高产γ‑氨基丁酸的乳酸菌诱变方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)发酵液的制备：选取实验室保存的乳酸片球菌ZY‑6(Weissella viridescens ZY‑6)作为出发菌株，该菌株已于2018年5月28日保存在中国广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：60377，将该菌株接种到马铃薯或马丁氏液体培养基中活化培养2d‑6d，得到发酵液；(2)菌悬液制备：取上述发酵液10mL于三角瓶中，并加入50颗玻璃珠，震荡10min‑20min，然后用无菌水按照1:10，1:100，1:1000比例，稀释成不同浓度，制得菌悬液；(3)诱变处理：①紫外诱变处理：不同浓度的菌悬液在红光灯下各吸5ml于9cm双碟中，放入搅拌子，于15W、距离照射菌悬液30cm的紫外灯下，分别照射0s、15s、30s、45s、60s、75s、90s，制定致死率曲线，选择致死率在70％‑90％的时间诱变，制得处理液；②处理液的分离：吸0.5ml的处理液于第1号稀释管中，得10‑1稀释菌液，如此重复6次，依次稀释到10‑6稀释菌液；③紫外‑氯化锂复合处理：将稀释到10‑6稀释菌液重复上述紫外诱变处理进行二次诱变，将二次诱变后的菌液涂布在含0.2％‑0.3％的氯化锂培养基上；(4)培养：所有涂布完成的培养基放入培养箱中在35℃‑40℃条件下培养36h‑72h。