[发明专利]一种外源表达FLS2蛋白的方法在审
| 申请号： | 201811280260.3 | 申请日： | 2018-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN109402142A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 汤娇;孙亚东;韩志富;柴继杰;石巍 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蜜蜂研究所 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/866;C12N15/66;C07K14/415 |
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| 地址： | 100093*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种外源表达FLS2蛋白的方法。该方法包括：在pFastBacTM1的BamH1酶切位点前加入Hemolin信号肽得到pFastBacTMHem载体；用BamH1和Sal1酶切FLS2基因，采用BamH1和Xho1酶切pFastBacTMHem载体，酶切后连接，构建外源表达载体；外源表达载体转染昆虫细胞，培养该细胞后，收获细胞和上清，上清液经层析，纯化后获得构象正确的FLS2蛋白，表达量达2.6mg/L。本发明方法克服了现有技术采用原核表达系统无法获得正确构象的FLS2蛋白或采用其他真核表达系统FLS2蛋白表达量低的缺点，提高了构象正确的FLS2蛋白的表达量，节约了成本。 | ||
| 搜索关键词： | 外源表达 蛋白 构象 酶切 表达量 原核表达系统 真核表达系统 转染昆虫细胞 蛋白表达量 细胞 技术采用 上清液 信号肽 层析 构建 位点 基因 节约 收获 | ||
【主权项】：
1.一种外源表达FLS2蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：(1)构建含有杆状病毒来源的抑血细胞聚集素Hemolin信号肽的载体；(2)克隆得到FLS2外显子基因，将FLS2外显子基因连入步骤(1)的载体上，得到外源表达载体；(3)外源表达载体转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒，病毒侵染昆虫细胞，培养该昆虫细胞后，收获细胞和上清，上清液经层析，纯化后获得构象正确的FLS2蛋白。
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