[发明专利]基于磁性分离的化学发光酶联免疫检测DNMT1的方法

摘要

本发明提供了一种基于磁性分离的化学发光酶联免疫检测DNMT1的方法，包括：封闭预处理、加磁性单克隆抗体、加抗原、加多克隆抗体、加酶标二抗、加化学发光底液、发光检测及建立回归方程等步骤。本发明提供的上述方法构建一种新型的化学发光新体系HRP‑Luminol‑H₂O₂‑BIP，以免疫磁珠作为固相载体，结合聚苯乙烯微孔板多样本同时检测的统一性和磁珠磁分离的优点，将化学发光的高灵敏性、抗原抗体反应的高特异性和酶催化的高效专一性三者有机结合起来，建立双抗夹心法对DNMT1进行测定。

主权项

1.一种基于磁性分离的化学发光酶联免疫检测DNMT1的方法，包括以下步骤：封闭预处理将封闭液加到聚苯乙烯微孔板中依次进行温育和第一阶段洗板处理；加磁性单克隆抗体向经过第一阶段洗板处理的聚苯乙烯微孔板中加入Fe3O4@McAbDNMT1稀释液并进行磁分离和第二阶段洗板处理，使得所述聚苯乙烯微孔板悬浮有第一复合物，所述第一复合物具有Fe3O4@McAbDNMT1结构，且所述Fe3O4@McAbDNMT1为表面被DNMT1小鼠抗人单克隆抗体共价修饰的Fe3O4纳米免疫磁珠；加抗原向悬浮有所述第一复合物的聚苯乙烯微孔板中加入DNMT1标准抗原溶液或待测抗原溶液，并依次进行温育、磁分离和第三阶段洗板处理，使得所述聚苯乙烯微孔板悬浮有第二复合物，该第二复合物具有Fe3O4@McAbDNMT1@AgDNMT1结构；加多克隆抗体向悬浮有所述第二复合物的聚苯乙烯微孔板中加入兔抗人多克隆抗体PAbDNMT1稀释液，并依次进行温育、磁分离和第四阶段洗板处理，使得所述聚苯乙烯微孔板悬浮有第三复合物，该第三复合物具有Fe3O4@McAbDNMT1@AgDNMT1@PAbDNMT1结构；加酶标二抗向悬浮有所述第三复合物的聚苯乙烯微孔板中加入酶标二抗稀释液，并依次进行温育、磁分离和第五阶段洗板处理，且所述聚苯乙烯微孔板中悬浮有第四复合物，该第四复合物具有Fe3O4@McAbDNMT1@AgDNMT1@PAbDNMT1@酶标二抗结构；加化学发光底液向悬浮有所述第四复合物的聚苯乙烯微孔板中依次加入发光底液A和过氧化氢溶液进行化学发光处理，形成化学发光溶液，其中，所述发光底液A中包括鲁米诺和羟基联苯；发光检测及建立回归方程利用化学发光检测仪检测所述化学发光溶液的发光强度，根据检测的所述发光强度与所述DNMT1标准抗原溶液或待测抗原溶液浓度之间的关系，建立检测DNMT1的回归方程。