[发明专利]一种功能性嗜酸乳杆菌黏液结合蛋白的表达纯化及其应用

摘要

本发明公开了一种功能性嗜酸乳杆菌黏液结合蛋白的表达纯化及其应用，特点是包括以下步骤：将嗜酸乳杆菌ATCC 4356的mub基因进行PCR扩增，扩增的片段插入pEASY‑Blunt Zero载体后转化到Trans1‑T1感受态细胞，用限制性内切酶酶切pEASY‑mub并连接经双酶切的表达载体pET‑32a中，转化到BL21（DE3）感受态细胞在LB肉汤中培养，当OD 600值达到0.5时加入0.8mM的IPTG诱导蛋白质表达后超声波裂解，利用Ni‑IDA亲和层析柱纯化目的蛋白，收集的目的蛋白用PBS透析后冷冻干燥得到的粉末即为产品，优点是对LPS引起的炎症反应具有较好的抑炎调节功能。

主权项

1.一种功能性嗜酸乳杆菌黏液结合蛋白的表达纯化，其特征在于具体包括以下步骤：将嗜酸乳杆菌ATCC 4356的mub基因从基因组DNA进行PCR扩增，扩增的片段插入pEASY‑Blunt Zero载体获得pEASY‑mub，转化到Trans1‑T1感受态细胞；用BamHⅠ和Hind Ⅲ限制性内切酶酶切pEASY‑mub，并连接到同样被双酶切的表达载体pET‑32a中，转化到BL21（DE3）感受态细胞后，在LB肉汤中培养，当OD 600值达到0.5时，加入0.8mM的IPTG，在温度为25℃，转速为180r/min的摇床中培养5小时以诱导蛋白质表达，收获细胞并在PBS缓冲液中用超声波裂解，将裂解液采用Ni‑IDA亲和层析柱纯化目的蛋白，收集的目的蛋白用10mM pH7.2的PBS缓冲液透析后于‑80℃预冻6h后，迅速放入真空冷冻干燥设备中于80‑120Pa干燥处理24h，得到的粉末即为嗜酸乳杆菌黏液结合蛋白。