[发明专利]一种新型抗人乳头瘤病毒蛋白的制备方法在审
| 申请号： | 201811299411.X | 申请日： | 2018-11-02 |
| 公开（公告）号： | CN109517042A | 公开（公告）日： | 2019-03-26 |
| 发明（设计）人： | 吴凯;李思慧;魏赵延;林伟强;曹丹枫;朱庆平;徐飞 | 申请（专利权）人： | 江苏正大天创生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/025 | 分类号： | C07K14/025;C12N15/81;A61K38/16;A61P31/20 |
| 代理公司： | 南京正联知识产权代理有限公司 32243 | 代理人： | 卢霞 |
| 地址： | 225300 江苏省泰州市中国医*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种新型抗人乳头瘤病毒蛋白的制备方法，包括以下步骤：1）从各大生物学数据库中查找N端突变的PAP基因的已知序列，依据密码子的简并原则，使用毕赤酵母Pichia pastoris高频使用密码子替换PAP基因序列中毕赤酵母的低频使用密码子；依据密码子修改后的基因序列，人工合成基因序列，所述的N端突变PAP基因是去除了N端22个氨基酸序列的PAP基因，其序列如SEQ NO.1所示：2）将人工合成的基因序列连接到分泌型表达载体pPICk9上；3）将重组表达载体pPICk9‑PAP电转入毕赤酵母中，使用甲醇诱导重组PAP蛋白的表达。本发明的方法可以利用毕赤酵母的高密度发酵可以在体外大量生产重组型的PAP蛋白，有利于PAP蛋白的大规模生产。 | ||
| 搜索关键词： | 毕赤酵母 蛋白 基因序列 密码子 人乳头瘤病毒 制备 基因 突变 人工合成基因序列 分泌型表达载体 生物学数据库 重组表达载体 氨基酸序列 高密度发酵 密码子替换 甲醇诱导 已知序列 重组型 简并 体外 转入 查找 | ||
【主权项】：
1.一种新型抗人乳头瘤病毒蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）从各大生物学数据库中查找N端突变的PAP基因的已知序列，依据密码子的简并原则，使用毕赤酵母Pichia pastoris高频使用密码子替换PAP基因序列中毕赤酵母的低频使用密码子；依据密码子修改后的基因序列，人工合成基因序列，所述的N端突变PAP基因是去除了N端22个氨基酸序列的PAP基因，其序列如SEQ NO.1所示：2）将人工合成的基因序列连接到分泌型表达载体pPICk9上；3）将重组表达载体pPICk9‑PAP电转入毕赤酵母中，使用甲醇诱导重组PAP蛋白的表达。
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