[发明专利]一种自主发光堪萨斯分枝杆菌及其构建方法有效
| 申请号： | 201811300054.4 | 申请日： | 2018-11-02 |
| 公开（公告）号： | CN109234219B | 公开（公告）日： | 2022-11-18 |
| 发明（设计）人： | 王邦兴;王余业;郝建帮;方坤;刘晨;程杰 | 申请（专利权）人： | 湖北景瑞天恒生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/87;C12R1/32 |
| 代理公司： | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 韩梦晴 |
| 地址： | 443000 湖北省宜昌市中国（*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种自主发光堪萨斯分枝杆菌，该自主发光堪萨斯分枝杆菌基于堪萨斯分枝杆菌，采用电转化法，插入重组质粒pOPTIg，经传代培养筛选而成。本发明提供的自主发光堪萨斯分枝杆菌在传代培养中更加稳定；本发明设计的一种自主发光堪萨斯分枝杆菌的构建方法，在该构建过程中，提供重组质粒pOPTIg，该重组质粒pOPTIg转入堪萨斯分枝杆菌中经过筛选，从而获得抗性基因、整合酶基因和整合位点均丢失的无抗性筛选标记的自主发光堪萨斯分枝杆菌。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 自主 发光 堪萨斯 分枝杆菌 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种自主发光堪萨斯分枝杆菌，其特征在于：所述自主发光堪萨斯分枝杆菌基于堪萨斯分枝杆菌，采用电转化法，插入重组质粒pOPTIg，经传代培养筛选而成；所述重组质粒pOPTIg的核苷酸序列为：SEQ ID NO:5；所述重组质粒pOPTIg按顺时针方向依次含有启动子、发光所需酶基因luxCDABE、抗性筛选基因Tsr、整合酶基因Int、整合酶整合位点attP的融合基因以及复制子，所述融合基因两端含有同向重复序列DifL和DifR；所述整合酶基因Int和所述整合酶整合位点attP分别为分枝杆菌噬菌体Giles的整合酶Int和整合位点attP，其序列为：SEQ ID NO:1；所述抗性筛选基因Tsr为硫链丝菌素抗性基因Tsr，其序列为：SEQ ID NO:4。
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