[发明专利]弓形虫SAG2基因和ROP9基因重组腺病毒构建的方法及重组腺病毒和应用

摘要

本发明公开了一种弓形虫SAG2（表面抗原2）基因和ROP9（棒状体蛋白9）基因重组腺病毒构建的方法及重组腺病毒和应用。从Toxoplasma gondii RH株中分别扩增出SAG2基因和ROP9基因，将获得的目的基因克隆到穿梭载体pHBAd‑EF1a‑MCS‑3flag‑CMV‑EGFP中，利用脂质体转染法将重组腺病毒穿梭质粒pHBAd‑SAG2‑ROP9‑EGFP与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293A细胞，重组并包装获得含有SAG2基因和ROP9基因的重组腺病毒Ad‑SAG2‑ROP9‑EGFP；将此重组腺病毒免疫Balb/c小鼠后，小鼠的抗体水平得到显著提高，活化的TCL和Th淋巴细胞比例显著增高，IF‑γ、IL‑6和TN‑α等细胞因子显著增高，且对Balb/c小鼠产生一定的保护作用。

主权项

1.一种弓形虫SAG2基因和ROP9基因重组腺病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1）从Toxoplasma gondii RH株中分别扩增出SAG2基因序列GI：M33572.1和ROP9基因序列GI：AJ401616.1；所述的SAG2基因和ROP9基因的扩增包括：以SAG2‑F SEQ ID NO.1和SAG2‑R SEQ ID NO.2 为引物，以RH株的RNA为模板，RT‑PCR扩增获得SAG2基因；以ROP9‑F SEQ ID NO.3和ROP9‑R SEQ ID NO.4为引物，以RH株的RNA为模板，RT‑PCR扩增获得ROP9基因；2）将目的基因重组至腺病毒穿梭质粒，获得的重组质粒pHBAd‑SAG2‑ROP9‑EGFP与腺病毒大骨架质粒pBHGlox E1,3Cre共转染HEK293A细胞，重组并包装获得重组腺病毒Ad‑SAG2‑ROP9‑EGFP。