[发明专利]一种利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建动物肿瘤模型的方法在审
| 申请号： | 201811325558.1 | 申请日： | 2018-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN109536528A | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 靖超 | 申请（专利权）人： | 武汉纤然生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/90 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 祝蓉蓉;徐瑛 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道6*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术构建动物肿瘤模型的方法，通过先对动物胶质瘤肿瘤细胞的冻存细胞进行单克隆培养，然后选用CRISPR‑Cas9基因技术，针对于MDR1设计各自的sgRNA，并将其插入至腺病毒中并在转染细胞中连续PCR扩增，获得大量病毒液，最后将腺病毒价值胶质瘤肿瘤细胞中，敲除对应的基因片段，从而避免了因这些基因片段损伤突变而使胶质瘤细胞产生耐药性，这种方法基因消除效率高，有助于研究胶质瘤肿瘤耐药的机理，研发更有效的抗肿瘤靶向药。 | ||
| 搜索关键词： | 动物肿瘤模型 基因片段 技术构建 肿瘤细胞 胶质瘤 腺病毒 单克隆培养 胶质瘤细胞 耐药性 动物胶质 基因技术 基因消除 抗肿瘤靶 肿瘤耐药 转染细胞 连续PCR 基因 病毒液 冻存 扩增 敲除 研发 突变 损伤 细胞 研究 | ||
【主权项】：
1.一种利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术构建动物肿瘤模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：A1、取动物胶质瘤肿瘤细胞冻存细胞进行单克隆培养，得胶质瘤肿瘤细胞悬液，备用；A2、针对MDR1中的蛋白质编码序列，通过CRISPR在线设计工具分别设计针对于MDR1的sgRNA；所述MDR1的基因序列如SEQ ID NO.1所示；A3、将各sgRNA插入到腺病毒载体中，使其能表达，得重组腺病毒载体；A4、将重组腺病毒载体转染至转染细胞中，直至出现明显细胞病变后，收集细胞，冻融释放病毒，在转染细胞中连续PCR扩增，获得大量病毒液，分层纯化病毒液，得高浓重组腺病毒载体；A5、将高浓重组腺病毒载体加至胶质瘤肿瘤细胞悬液中，敲除胶质瘤肿瘤细胞的MDR1基因，得动物肿瘤模型。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于武汉纤然生物科技有限公司，未经武汉纤然生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811325558.1/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种基因点突变修复的新方法
- 下一篇：一种高效重组痘苗病毒载体及其建立方法
