[发明专利]基于高通量测序的中枢系统感染病原检测文库构建方法、检测方法和试剂盒在审
| 申请号： | 201811327028.0 | 申请日： | 2018-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN109610008A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 刘华勇;萧卓;袁剑颖;吴红龙 | 申请（专利权）人： | 广州华大基因医学检验所有限公司;华大生物科技（武汉）有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 510006 广东省广州市番禺区大学城小谷围*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 一种基于高通量测序的中枢系统感染病原检测文库构建方法、检测方法和试剂盒，文库构建方法包括：从样本中提取DNA并将DNA片段化得到片段化的DNA序列；将片段化的DNA序列加入末端修复体系中进行末端修复反应，末端修复反应完成后，直接向反应体系中添加接头序列、连接酶、ATP以及聚乙二醇，在连接酶作用下以ATP为辅酶，催化接头序列连接到末端修复反应产物的两端，得到接头连接产物；纯化接头连接产物后，加入与接头序列两端互补的核酸单链作为引物进行PCR扩增。该方法能够实现快速、广谱的中枢系统感染病原微生物检测，无需预知太多检测样本的临床信息，可以快速高效地进行检测，检测结果无偏向性，还可以解决低浓度脑脊液样本文库构建失败率高的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 末端修复 文库构建 接头序列 中枢系统 检测 高通量测序 病原检测 接头连接 连接酶 片段化 试剂盒 感染 样本 病原微生物检测 脑脊液样本 核酸单链 检测结果 聚乙二醇 临床信息 提取DNA 偏向性 广谱 引物 催化 失败 | ||
【主权项】：
1.一种基于高通量测序的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：从样本中提取DNA并将所述DNA片段化得到片段化的DNA序列；将所述片段化的DNA序列加入末端修复体系中进行末端修复反应，末端修复反应完成后，直接向反应体系中添加接头序列、连接酶、ATP以及聚乙二醇，在所述连接酶作用下以ATP为辅酶，催化所述接头序列连接到末端修复反应产物的两端，得到接头连接产物；纯化所述接头连接产物后，加入与所述接头序列两端互补的核酸单链作为引物进行PCR扩增，得到所述文库；优选地，所述聚乙二醇为PEG 8000。
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