[发明专利]一种马里兰烟叶发酵提取物的制备方法及其应用

摘要

本发明提供一种马里兰烟叶发酵提取物的制备方法及其应用，其是将马里兰烟叶粉碎后，采用马里兰烟杆固定化吸附微生物菌株，对马里兰烟粉进行温育水解发酵，再结合连续逆流超声提取，制备马里兰烟叶提取物，该提取物具有天然烟草浓郁本香，刺激性降低，纯化分离步骤简单，工艺条件温和，提取率和生产效率提高；在传统卷烟、新型加热不燃烧卷烟中加料加香应用，具有天然烟草本香，劲头足，透发感强，带有果香气、奶甜香气，与卷烟烟气协调且风格一致。

主权项

1.一种马里兰烟叶发酵提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)原料前处理：马里兰烟叶经粉碎机粉碎至40目～100目粉末；(2)微生物菌株的活化：将扣囊复膜孢酵母Saccharomycopsis fibuligera和桑肠杆菌Enterobacter mori VL4‑3的活性固体冻干菌粉，加入到10～20倍质量的灭菌处理的质量浓度为5～20％葡萄糖溶液中，置于38～50℃水浴锅活化30～60min，得到微生物菌株活化液，其中所述的桑肠杆菌Enterobacter moriVL4‑3保藏号为CCTCC NO：M2012020，于2012年2月16日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心；(3)固定化载体制备：将马里兰烟的烟杆洗净烘干后处理成碎块，高压灭菌后烘干；(4)微生物菌株的固定化处理：称取上述步骤(3)灭菌烘干后的马里兰烟杆碎块装入容器，按照碎块与活化液质量比为1:5～30加入已培养活化好的微生物菌株活化液，放置于4±0.5℃冷藏柜固定12～30h，过滤得到固定化微生物菌株的烟杆碎块；(5)马里兰烟叶的固定化发酵：将步骤(1)所得马里兰烟叶粉末与15～30倍质量的水混合均匀，加入步骤(4)所述固定化微生物菌株的烟杆碎块，固定化微生物菌株的烟杆碎块与马里兰烟叶粉末质量比为1:0.5～2，在温度为40～55℃，匀速搅拌，添加乙二酸调节pH值为4.5～6.5，发酵1～5d，筛网过滤去除烟杆碎块，微孔过滤除去马里兰烟粉残渣，保留马里兰烟叶发酵液A；(6)连续逆流超声提取：将步骤(5)所得马里兰烟粉残渣按速率0.1～0.8kg/10min投料至浸出舱，开启主机和超声波发生器，调节温度60～100℃，料液比为质量比1:2～6，从浸出舱低端运行0.2～1h后调节出液阀门均匀放液，控制溶剂加入流量，保持浸出仓液位平衡，连续逆流超声提取达30～60min时，投料加入占马里兰烟粉质量0.1～1％的中性醋酸铝，当连续逆流超声提取共达50～150min时，停止生产工艺，排渣，得到浸出液B；(7)将步骤(5)的发酵液A和步骤(6)的浸出液B合并，得到马里兰烟发酵提取液。