[发明专利]一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法有效
| 申请号： | 201811338788.1 | 申请日： | 2018-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN109486901B | 公开（公告）日： | 2022-08-05 |
| 发明（设计）人： | 张凌晶;曹敏杰;刘光明;孙乐常;章骞;靳小莹 | 申请（专利权）人： | 集美大学 |
| 主分类号： | C12Q1/52 | 分类号： | C12Q1/52;G01N33/573 |
| 代理公司： | 深圳国联专利代理事务所(特殊普通合伙) 44465 | 代理人： | 王天兴 |
| 地址： | 361000 福建省*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及食品添加剂的检测方法，具体是指一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法，包括谷氨酰胺转氨酶食品添加剂的分离纯化、谷氨酰胺转氨酶浓度的测定、Western‑blotting灵敏度的检测分析、采取建立的Western‑blotting法检测市售鱼糜制品等四个步骤，操作的过程易控制且检测结果准备，适用于大多数鱼糜制品。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 制品 谷氨酰胺 转氨酶 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)谷氨酰胺转氨酶(MTGase)食品添加剂的分离纯化：利用双水相萃取的方法，称量6g谷氨酰胺转氨酶(MTGase)食品添加剂，溶于400mL的20mmol/L的Tris‑Hcl中，与聚乙二醇6000/(NH4)2SO4萃取液按照1：5的比例混合，静置2h后，取下层液相；(2)谷氨酰胺转氨酶(MTGase)浓度的测定：利用Bio‑Rad试剂盒的方法测定蛋白浓度，根据不同的浓度的BSA在595nm处的吸光值建立标准曲线，计算TGase的浓度；(3)Western‑blotting灵敏度的检测分析：以1/50mg/mL MTGase为起始浓度，采用2倍稀释法，逐级稀释至1/800mg/mL，在抗MTGase的抗体以1：10000的比例稀释下，上样10μL，确定Western‑blotting的最低检测限；(4)采取建立的Western‑blotting法检测市售鱼糜制品：用20mmol/L Tris‑Hcl缓冲液对鱼糜制品进行MTGase提取及蛋白浓度的测定；以纯化的MTGase为半定量的对照，进行SDS‑PAGE分析，由此检测鱼浆中添加的MTGase。
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