[发明专利]一种简便的动物组织中微管蛋白的检测方法

摘要

本发明提供了一种简便易行、不需要较长时间培训、需要的仪器较少、能进行高通量检测、耗时较少的动物组织中微管蛋白的检测方法。和传统的Western blot的方法来比较，具有检测速度快，检测成本低廉、简便易行、能进行大量样本检测等优点。在对实验动物的检测方面，能够代替Western blot。

主权项

1.一种简便的动物组织中微管蛋白的检测方法，其特征在于：步骤如下：A样品处理：取出少量冷冻或新鲜的动物组织60～80mg，以预冷的PBS进行清洗，去除PBS，按组织体积比(1:10)，加入10倍体积的预冷lysis buffer在冰上进行研磨，研磨后，4℃孵育40min并转移至预冷的离心管中；离心(12000r/min，4℃)5min；将上清移入另一离心管中，采用传统BCA试剂盒检测蛋白浓度；加入loading buffer在95℃热处理5分钟，备用；B包被本检测方法样品制备无需要进行蛋白纯化，只需要直接进行加样即可，将loading buffer处理过的样品，直接进行包被；包被的材料为四边及底部均为黑色、完全不透光的酶标板；样品加样体积为0.1‑30uL，加样蛋白量为0.1‑30ug；包被条件为：在37℃下，在湿盒中包被2h；C封闭将包被2h后的酶标板倾倒干净，并以吸水纸吸拍干；再加入5％的脱脂牛奶，要求覆盖整个酶标孔，添加量300uL；在37℃的条件下，在湿盒中封闭2小时；D一抗反应以TBST常温下清洗四次，每次清洗时，TBST加满整个反应孔，加入量约300uL；清洗后，加入一抗1‑100uL；在37℃的条件下，在湿盒中反应1h；E二抗反应以TBST常温下清洗四次，每次清洗时，TBST加满整个反应孔，加入量约300uL；清洗后，加入二抗1‑100uL，在湿盒中反应1h；F显色以TBST常温下清洗四次，每次清洗时，TBST加满整个反应孔，加入量约300uL；ECL试剂，按1:1配制；清洗后，加入配制好的ECL试剂1‑200uL，显色3min后，检测结果。