[发明专利]一种犬类真皮成纤维细胞原代培养方法

摘要

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种犬类真皮成纤维细胞原代培养方法，由以下步骤组成：（1）剪取成年犬胸腹处皮肤组织；（2）清洗皮肤组织，去除皮下脂肪和结缔组织，然后将皮肤组织剪碎并转移至离心管内；（3）向离心管内加入1mLⅡ型胶原酶溶液并剪成糊状，加入5mLⅡ型胶原酶混匀，置于培养箱内至组织浆液完全消化；（4）取出离心管进行离心，弃上清液，加入培养基重悬，重悬液用细胞筛过滤，所得过滤液再次离心，弃上清液，加入细胞培养液重悬，然后转移到六孔板内，加入培养液；（5）置于培养箱中静置培养48h，每天更换一次新鲜培养液，直至获得犬类真皮成纤维原代细胞。本方法操作难度低，培养程序简单且培养效率较高。

主权项

1.一种犬类真皮成纤维细胞原代培养方法，其特征在于，由以下步骤组成：（1）用无菌手术剪剪取成年犬胸腹处1cm×1cm皮肤组织一块，置于75%酒精浸泡消毒过的密封袋内迅速带入超净台；（2）在超净台内，用双抗PBS溶液清洗皮肤组织，用无菌剪刀和镊子去除皮下脂肪和结缔组织，用上述双抗PBS溶液继续清洗2‑4次，然后将皮肤组织剪碎并转移至5mL离心管内；（3）向5mL离心管内加入1mLⅡ型胶原酶溶液并将皮肤组织剪成糊状，将组织浆液转移至15mL离心管内，加入5mLⅡ型胶原酶混匀，置于37℃、5% CO2培养箱内消化，间隔2h观察消化情况直至组织浆液完全消化；（4）取出离心管进行离心，弃上清液，加入培养基重悬，重悬液用细胞筛过滤，所得过滤液再次离心，弃上清液，加入细胞培养液重悬，然后转移到六孔板内，加入培养液；（5）置于37℃、5% CO2培养箱中静置培养48h，然后用培养基清洗培养板去除杂质，每天更换一次新鲜培养液，继续培养直至获得犬类真皮成纤维原代细胞。