[发明专利]一种玫烟色棒束孢WSWL21837菌株孢子粉生产方法

摘要

本申请公开了一种玫烟色棒束孢WSWL21837菌株孢子粉生产方法，方法包括：对玫烟色棒束孢WSWL21837菌株进行活化、制备一级液体菌种、制备二级液体菌种、进行固体发酵培养、对孢子粉进行干燥与收集。本发明提供的技术方案，采用液‑固双相发酵培养技术，以1/4萨氏培养液为液体发酵培养基质，以麦麸为固相发酵培养产孢基质，以食用菌单口菌种袋为发酵产孢容器，该方法操作简作，菌株液相和固相培养生长快，产孢量大，孢子含量高，孢子萌发率高，全部发酵培养周期在20天左右，可在玫烟色棒束孢分生孢子粉的规模生产中应用，从而为害虫生防玫烟色棒束孢制剂的开发提供技术保障。

主权项

1.一种玫烟色棒束孢WSWL21837菌株孢子粉生产方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、对玫烟色棒束孢WSWL21837菌株进行活化：采用萨氏培养基，于25±1℃、光照条件为16L:8D的培养箱中恒温培养15d；步骤二、制备一级液体菌种：采用蛋白胨含量为2.5g/L、酵母粉含量为2.5g/L、葡萄糖含量为10.0g/L、pH为6.5的1/4萨氏培养液，每5块菌饼置于100mL萨氏培养液中，然后置于25℃、光照条件为16L:8D、转速为200rpm/min的恒温摇床中培养3d，制得一级液体菌种，将每300mL菌液存放于容积为500mL的锥形瓶中；所述菌饼为利用直径为15mm的打孔器将经萨氏培养基活化后的菌落制成的直径为15mm，厚度为5mm的菌饼；步骤三、制备二级液体菌种：在摇床转速为100rpm/min条件下，采用蛋白胨含量为2.5g/L、酵母粉含量为2.5g/L、葡萄糖含量为10.0g/L、pH为6.5的1/4萨氏培养液，将制得的每5瓶一级液体菌种和200L萨氏培养液加入发酵罐中发酵，发酵温度环境在26‑28℃之间，罐压在0.02‑0.03Mpa之间；发酵的前16‑24h保持摇床转速为50rpm/min，发酵中期逐渐提高转速到100rpm/min；整个发酵过程培养3d，制得二级液体菌种；步骤四、进行固体发酵培养：采用无菌麦麸作为培养基质，无菌食用菌单口菌种袋作为产孢容器，以无盖塑料框作为乘载容器，无菌食用菌单口菌种袋的长、宽、高分别为：350mm、105mm、200mm，无盖塑料框的长、宽、高分别为350mm、250mm、100mm，每个菌种袋装固相麦麸基质0.5kg，采用液‑固双相法，按照接种量固相麦麸基质：菌液＝1g：3.75mL的比例进行接种，之后平铺到塑料框中，放到培养架上进行培养，四周用经过灭菌处理的白色湿润棉布包围，保持相对湿度在90％以上、温度为25℃的密闭环境中培养3‑4d；待菌丝长满整个培养基质且表面出现孢子后，将固体培养基反扣于培养架上进行开放式培养，在相对湿度为85％、温度为27℃的环境中继续培养4‑5d，整个培养过程光照条件为L:D＝24:0；步骤五、对孢子粉进行干燥与收集：待固体培养基内、外部均布满玫烟色分生孢子后即停止产孢培养，将产孢盘置于30℃的温度环境中烘干处理72h，然后采用振荡筛收集孢子粉。