[发明专利]一种苗期甘薯黑斑病精准抗性鉴定方法

摘要

本发明公开一种苗期甘薯黑斑病精准抗性鉴定方法，属于农业植保领域，包括1)病菌分离与活化；2)PS培养液的制备；3)病原菌的摇培；4)黑斑病菌孢子悬浮液的制备；5)参试薯苗准备和接种；6)调查评价；本发明鉴定方法科学高效，操作简单，采用孢子液灌根接种鉴定，接近于田间甘薯幼苗感染黑斑病的实际情况，鉴定结果更加精准可靠，同时避免了水培薯苗抗病鉴定过程中薯苗茎秆容易腐烂的问题，和采用薯块进行抗病鉴定过程中薯块保湿后被杂菌污染容易腐烂的问题，为苗期甘薯黑斑病提供了一种精准抗性鉴定方法，为早期快速大量筛选甘薯黑斑病抗性品种提供了有力的保障，对于指导甘薯抗病育种具有重要的应用价值。

主权项

1.一种苗期甘薯黑斑病精准抗性鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)病菌分离与活化：从田间采集发病薯块，用组织分离法和单孢分离法分离纯化甘薯黑斑病菌，并经科赫式法则验证后，采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，培养7天，备用；2)PS培养液的制备：称取马铃薯20g加入1L超纯水煮沸至马铃薯完全烂软，纱布过滤后加入15g蔗糖，加超纯水定容至1L，每个三角瓶分装30mL，然后于121℃高压灭菌15min备用；3)病原菌的摇培：取出活化好的甘薯黑斑病菌，用直径为6mm的打孔器打取菌碟，每个三角瓶中接种20个菌碟，将接种好的三角瓶置于28℃恒温摇床中，于120rpm/min摇培48h；4)黑斑病菌孢子悬浮液的制备：采用滤纸过滤收集滤液，显微镜下观察并调节孢子悬浮液浓度为1×105CFU/ml；5)参试薯苗准备和接种：从甘薯储藏库取甘薯品种，每个3块，置于装土的盆钵中催芽，待发芽后每个品种剪取3棵生长一致的甘薯幼苗，分别种植在装灭菌土的盆钵中，将制备好的孢子悬浮液进行灌根处理，每个盆钵灌根量为50ml，之后每3天用灭菌水均匀喷雾；6)调查评价：接种15天后调查薯苗黑斑病发病情况，并根据病情指数分级标准将薯苗分为0、1、3、5、7、9级，共6个等级，根据平均病情指数将品种对黑斑病的抗性分为抗病、中抗、感病和高感四个级别；平均病情指数＝(重复1病情指数+重复2病情指数+重复3病情指数)/3；苗期甘薯黑斑病抗性水平按照以下标准进行确定：抗病：平均病情指数≤2.0；中抗：2.0＜平均病情指数≤4.0；感病：4.0＜平均病情指数≤6.0；高感：平均病情指数＞6.0；所述的分级标准是：0级：整株健康无病症；1级：植株正常生根，地下部茎有零星黑斑，茎基部叶片发黄或有萎蔫，地上部正常分枝生长；3级：植株生根但根系较少，地下部茎有连片黑斑，茎基部叶片发黄，薯苗生长缓慢；5级：植株不生根，地下部茎有连片黑斑，茎基部叶片发黄，薯苗完全不分枝；7级：地下部坏死腐烂，整株叶片发黄，植株萎蔫；9级：地下部坏死腐烂，薯苗心叶腐烂，整株死亡。