[发明专利]一种金针菇液体菌种选育工艺

摘要

本发明提供了一种金针菇液体菌种选育工艺,在无菌环境下，取出发菌种，接种于菌丝体培养基中，在20℃静置培养8‑10d，所述菌丝体培养基每1000ml含有下述重量的原料：麦芽糖30‑45g，蛋白胨10‑15g、加水定容至1000ml；制备方法为：在锅内装入1000ml水，加入蛋白胨和麦芽糖，然后加水定容至1000ml，装在密封瓶中，在高压灭菌锅内110℃下灭菌处理25分钟。

主权项

1.一种金针菇液体菌种选育工艺，其特征在于，包括：步骤a，在无菌环境下，取出发菌种，接种于菌丝体培养基中，在20℃静置培养8‑10d，所述菌丝体培养基每1000ml含有下述重量的原料：麦芽糖30‑45g，蛋白胨10‑15g、加水定容至1000ml；制备方法为：在锅内装入1000ml水，加入蛋白胨和麦芽糖，然后加水定容至1000ml，装在密封瓶中，在高压灭菌锅内110℃下灭菌处理25分钟；步骤b，取接种培养后的菌丝体5g，加入细胞壁溶解酶制剂和氧化石墨烯，分离酶制剂为纤维素酶5‑10g，氧化石墨烯0.2‑1g，溶于100ml水中，纤维素酶为β‑1,4‑葡聚糖‑4‑葡聚糖水解酶，在超声装置以低频震荡均匀，灭菌后即得到原生质体溶液；其中，所述超声装置按照下述超声振动频率与加热温度的关系进行振动，控制温度在25‑35℃之间；在第一温度段，在25‑30℃温度范围内：式中，f1表示第一温度段的实时振动频率，T表示第一温度段内的实时温度，T0表示参考预设温度值，恒温温度为25℃，m表示加入的营养液中的菌丝体重量，M表示加入的营养液中的菌丝体和营养成分的总质量，c表示营养液的比热，f0表示第一温度段的预设振动频率，其为10kHz；其中，在第二温度段，在30‑35℃温度范围内：式中，f2表示第二温度段的实时振动频率，T表示第二温度段内的实时温度，T10表示参考预设温度值，恒温温度为30℃，m表示加入的营养液中的菌丝体重量，M表示加入的营养液中的菌丝体和营养成分的总质量，c表示营养液的比热，f10表示第二温度段的预设振动频率，其为20kHz；步骤c，取原生质体溶液0.6‑0.8ml涂抹接种于单细胞培养基表面，置于26‑28℃的培养箱中培养5‑6d，待单细胞培养基表面生长出白色菌落后，选取单个菌落接种于新的单细胞培养基中，在25℃下继续培养，选取具有双核单细胞菌株进行筛选试验；所述单细胞培养基每1000ml含有下述重量的原料：5g树皮、18份海藻糖、3.5g尿素、3g磷酸二氢钾、2g磷酸氢二钾以及2g硫酸镁,加水定容至1000ml；制备方法为：在121℃灭菌处理30min，将无菌培养基倒入无菌培养皿内，培养皿内培养基为20ml，冷却后即可；步骤d，于无菌环境下在出菇培养基中接种双核单细胞菌株，在25℃培养30‑35d，长满菌丝体；所述出菇培养基由下述重量份的原料组成：5‑7份麸皮、4‑6.5份豆渣、1‑1.5份氧化石墨烯、1‑1.5份壳聚糖、3‑5份玉米面、2‑3份琼脂、1‑2份碳酸钙、1‑2过磷酸钙，超声振动5‑10min，静置10‑12小时，培养基的含水量为72～75％；在该过程中，通过振动装置对石墨烯和壳聚糖来将营养成分进行混溶；该过程中，先加热至45℃，在45‑55℃温度范围内，加热同时搅拌，后降温至常温并搅拌；其中，在第三温度段，在45‑55℃温度范围内：式中，f3表示第三温度段的实时振动频率，T表示第三温度段内的实时温度，T20表示参考预设温度值，温度为45℃，c表示营养液的比热，f20表示第一温度段的预设振动频率，其为40kHz；其中，第四温度段，在降温过程中的，在25‑55℃温度范围内：式中，f4表示第四温度段的实时振动频率，T表示第四温度段内的实时温度，c表示营养液的比热，m表示加入的营养液中的金属元素重量，M表示加入的营养液中的营养成分的总质量，k表示氧化石墨烯的重量，k0表示壳聚糖的重量份，c表示营养液的比热，f30表示第四温度段的预设振动频率，其为30kHz；步骤e，将培养发菌后的菌袋移至出菇房内，去除表面菌种，控制出菇房温度为10‑12℃、空气相对湿度为90％，光照强度为10‑15Lx，子实体生长长度至10‑15cm时采收；步骤f，筛选出产量高于出发菌种10％以上的单细胞菌种为优良菌种。